GnRH-A免疫与母兔生殖激素浓度的变化

目的探讨促性腺激素释放激素类似物（GnRH-A）对动物生殖功能调节的效果和作用机制。方法 24只日本大耳白兔分为四组,分别在实验Ⅰ组（EG-I）、实验Ⅱ组（EG-II）和实验III（EG-III）组兔的颈背侧注射1.0 mL（100、100和50μg/mL）GnRH-A抗原,实验II组和实验III组于第3周以原剂量加强注射一次,用ELISA法测定血清GnRH抗体效价、促卵泡刺激素（FSH）和促黄体生成素（LH）含量。结果注射GnRH-A后10 d实验组兔均出现GnRH抗体,而对照组未检测到;EG-I在第30天达到高峰,而EG-II和EG-III于40～50 d至峰值,但在实验结束时（70 d）实验组均高于对照组,40～70 d时EG-II显著高于EG-I和EG-III。30～50 d时EG-II的LH明显高于EG-I和EG-III及对照组。EG-II和EG-III的FSH浓度在40 d达到峰值,但EG-II高于EG-I、对照组及EG-III,EG-I和对照组无显著差异。结论兔体内注射GnRH-A可以明显提高GnRH抗体效价,增强LH和FSH的合成与分泌,加强注射效果更明显,且与注射剂量相关,持续时间为40 d左右。     

雄兔垂体GnRHR的序列测定与生物信息学分析

目的探讨GnRH-A激动剂(阿拉瑞林)主动免疫对垂体GnRHR基因表达的影响和生物信息学特性。方法 30只日本大耳白兔(Oryctolagus cuniculus)随机均分为三组,在EG-Ⅰ和EG-Ⅱ皮下注射1.0 mL(100μg/mL)阿拉瑞林抗原,EG-Ⅱ于20 d以原剂量加强免疫1次;从兔垂体中提取总RNA,PCR扩增GnRHR基因,进行反转录、克隆和测序;实时荧光定量PCR分析垂体中GnRHR、FSH-β和LH-βmRNA的表达,用DNAman、Tm-pred、Signal P 3.0、Target P 1.1、Expasy、PSORT II prediction等生物信息学分析软件和在线工具,对GnRHR序列及其蛋白的理化特性、跨膜结构、信号肽和二级结构等进行分析与预测。结果①雄兔GnRHR的核苷酸为1179 bp,同源性达96%。ssDNA分子量362.66×103,dsDNA 726.78×103。②GnRHR二级结构中151(40.27%)个氨基酸组成α-螺旋,15(4.00%)个氨基酸组成β-折叠。③GnRHR由389个氨基酸组成,蛋白质的序列长度为375;理论等电点(pI)5.02,不稳定指数58.08,脂肪指数28.67,疏水性平均值(GRAVY)0.869,表明该蛋白为不稳定的疏水性蛋白。④GnRHR蛋白TM螺旋长度为17～23,有34个强跨膜螺旋区,从内到外有35个螺旋。⑤GnRHR信号肽的概率0.999,最可能的酶切部位在17和18位点。结论阿拉瑞林免疫可以明显降低垂体GnRHR、FSH-β和LH-β基因表达,加强免疫效果更佳。GnRHR是一种含有信号肽序列的不稳定的疏水性跨膜蛋白,具有明显的生物信息学特征。     

垂体GnRHR,FHS-β和LH-β基因表达与GnRHR生物信息学研究

为探讨GnRH-A激动剂主动免疫对雌兔垂体GnRHR、FSH-β和LH-βmRNA表达的影响及调节动物生殖功能的分子机理.24只日本大耳白兔分为4组,在EG-I、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ兔的颈背侧注射100 ? g 、100? g和50? g GnRH-A抗原,EG-Ⅱ和EG一Ⅲ 20d加强注射一次,用荧光定量PCR分析垂体中GnRHR、FSH-β和LH一βmRNA的表达,并测定GnRHR的核苷酸序列.结果表明雌兔垂体中存在GnRHR、FSH-β和LH-β基因.EG-Ⅱ和EG-Ⅲ的GnRHR、FSH-β和LH-βΔΔCt均显著高于EG-I(P < 0.05).GnRHR、FSH-β和LH-β的核苷酸序列的同源性分别为98%、100%和94%;GnRHR中a-螺旋占36.63%,理论等电点(pI)5.01,不稳定指数57.08,脂肪指数29.1,疏水性平均值(GRAVY)0.872,表明该蛋白为不稳定的疏水性信号蛋.GnRH-A能明显的影响兔GnRHR、FSH-β和LH-βmRNA在垂体中的表达,而且重复注射会加大这种变化.