CUEDC2中CUE结构域的表达纯化及结构初探

目的:建立CUEDC2中CUE结构域的原核表达系统,获得13C、15N同位素标记的CUE结构域蛋白质,以用于结构生物学研究。方法:利用分子生物学方法将CUE结构域编码序列构建到pET-28a原核表达系统,表达和纯化13C、15N标记的重组蛋白;用SDS-PAGE等方法对其进行鉴定。结果:目的蛋白经SDS-PAGE和MALDI-TOF/MS检测,相对分子质量正确,圆二色谱和核磁共振波谱结果显示目的蛋白折叠良好。结论:获得了高浓度、高纯度、折叠良好的CUE结构域标记蛋白质,利于进一步的结构生物学研究。     

CUEDC2的N端结构域溶液结构初步探索

目的:为了更好地研究CUEDC2(CUE domain containing 2)的生物学功能,对其N端含133个氨基酸残基的结构域的三维结构进行初步探索。方法:用亲和纯化方法纯化GST-CUEDC2(1-133 aa)和His-CUEDC2(1-133aa),采用圆二色谱和核磁共振方法初步研究其结构。结果:圆二色谱实验表明CUEDC2(1-133 aa)cut比CUEDC2(1-133 aa)uncut的螺旋结构更多,折叠更好;核磁共振实验表明CUEDC2(1-133 aa)cut的1H-15N HSQC谱交叉峰更多,峰强度更均匀。结论:CUEDC2(1-133 aa)cut为最适合用核磁共振方法进行结构计算的片段。