一种强力霉素诱导型白念珠菌基因敲除与筛选标记再循环工具包

【目的】在白念珠菌中建立一个快捷方便经济的基因敲除与筛选标记再循环的DNA操作系统。【方法】通过ExoIII介导的不依赖于连接酶的克隆策略,在异源筛选标记基因CmLEU2、CdHIS1和CdARG4基因的两侧分别插入了loxP位点,成为筛选标记基因盒扩增的模板。全基因合成了经过白念珠菌密码子优化的rTetR元件,并组装成Tet-on启动子。将密码子优化的重组酶Cre基因置于该启动子控制下。然后将他们插入筛选标记基因CdHIS1和CdARG4的CDS区域,形成筛选标记基因再循环载体。【结果】构建了3个用于白念珠菌基因敲除的侧翼含有loxP位点的筛选标记基因载体,以及2个含有Tet-on启动子控制的Cre酶的载体用于筛选标记基因的再循环。【结论】成功构建了一个白念珠菌中可诱导的基因敲除和筛选标记再循环的载体系统并成功应用于多个基因缺失株构建。这个系统有助于快速构建白念珠菌的单基因和多基因敲除菌株。     

铬对重金属去除菌影响的研究*

考察了Cr⁶⁺浓度和培养时间对4株重金属去除菌致死率的影响、重金属去除菌除铬性能的稳定性、吸附铬前后胞内外的变化、Cr⁶⁺对胞内可溶性还原糖含量的影响以及多种因素对重金属去除菌毒性,初步探讨了重金属去除菌的抗Cr⁶⁺机理。实验结果表明,4株实验菌的致死率随培养时间的变化趋势都是先升高后降低,最后再升高;假丝酵母的可驯化性较好;掷孢酵母73对高浓度Cr6+的耐受性最好;Cr⁶⁺对4株实验菌的各种代谢过程有一定影响;扫描电     

一株表面活性剂产生菌的筛选及其特性研究

从氧化沟含油污水中分离得到1株能产生物表面活性剂菌株S6(Pseudomonas sp.),经生理生化实验和16SrDNA序列分析鉴定,S6为铜绿假单胞菌。红外光谱分析得知S6在代谢过程中能够产生糖脂类表面活性物质。其临界胶束浓度(CMC)为50mg/L,可将水的表面张力由72mN/m降到33.9mN/m。发酵液的表面张力和排油直径的测定结果显示发酵液在不同的盐度、pH和溶解氧量条件下,具有较稳定的表面活性。通过正交实验确定了优化培养基条件为葡萄糖10g、尿素5g、磷酸二氢钾1g、微量元素液2mL、pH8.0、水1000mL;S6在优化培养基中合成生物表面活性剂的产量为0.173g/L。     

生物过滤法处理城市污水处理厂臭气

对某城市污水处理厂沉砂池的臭气进行了生物过滤处理。生物过滤池滤料层高1.5m,滤料体积55m³,臭气处理量为12000m³·h^-1。对除臭效果120d的监测和研究结果表明,进气中H₂S浓度在1.96～4.63mg·m^-3之间,NH₃的浓度为2.21～5.68mg·m^-3。处理后,出气中H₂S的浓度在0.03～0.97mg·m^-3间,去除率均达80%以上,NH₃浓度最高值仅为0.46mg·m^-3,低于1.0mg·m^-3的一级排放标准。生物除臭复合微生物主要包括细菌、酵母和霉菌,其中细菌含量最高,每克干滤料细菌含量达1.8～3.1×10⁸CFU。菌种鉴定结果表明,除臭菌主要有芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、动胶菌属(Zoogloea)、不动杆菌属(Acinetobacter)、硫杆菌属(Thiobacillus)、酵母属(Saceharomyces)、假丝酵母属(Candida)、曲霉属(Aspergillus)、青霉属(Penicillium)、根霉属(Rhizopus)等种属的微生物。     

融合酵母对重金属Cr的富集机理

研究了1株高效融合酵母对Cr的富集机理及其微观结构变化.研究结果表明,融合酵母对Cr6+的还原、吸附过程伴随着溶液H+离子的消耗.菌体表面的络合基团主要有氨基、羟基、磷酸基等,其中磷酸基团对吸附的影响最大,该基团屏蔽后总Cr去除率及Cr6+还原率分别降低了70%和46%;吸附过程趋向于将表面络合的Cr运输至细胞内并和细胞内物质形成更稳定的结合态,该过程可在吸附90min内达到平衡;Cr在细胞表面的吸附及还原作用会改变细胞微观结构,使细胞通透性增强.     

红螺菌对Cu2+的吸附研究

研究了4株红螺菌(R-01,R-02,R-03,R-04)对Cu^2 的生物吸附行为。结果表明,3株红螺菌(R-01,R-02,R-04)对20mg／L的Cu^2 有较高的吸附率,其中R-04达99．1％。进一步研究了R-04菌体的最佳吸附条件,在pH2、浓度为80mg／L Cu^2 、35℃、微光厌氧下吸附45min,吸附率、吸附量分别达94％,48．08mg／g。在一定的浓度范围内红螺菌对Cu^2 的吸附符合Langmuir吸附模型和Freundlich吸附模型,但符合Langmuir吸附模型的程度更优。     

一例以多发性骨破坏为显著特征的老年戈谢病的诊疗和基因检测分析

戈谢病(Gaucher’s disease)是一种罕见的常染色体隐性遗传病,由于葡萄糖脑苷脂酶(glucocerebrosidase,GBA)基因突变导致溶酶体中GBA活性降低或缺乏,造成其底物葡萄糖脑苷脂在溶酶体中贮积,产生肝、脾、肾、骨、造血系统甚至神经系统受累的临床表现。本文报道1例以多发性骨破坏为显著特征的老年患者,伴有幼年脾切除及“骨髓炎”病史,呈现肝脏显著增大、贫血、血小板减少及骨量减少等症状。临床检测显示,患者外周血GBA活性降低、葡糖鞘氨醇水平以及壳三糖酶活性显著升高;基因检测结果表明,患者GBA基因发生纯合错义突变NM＿001005741.2 c.770A>G(p.Asp257Gly)。经过6个月的酶替代治疗,患者血小板恢复正常、贫血改善、肝脏体积有所缩小。进一步检测发现患者母亲、长兄、次兄均存在该位点的杂合突变,符合孟德尔遗传规律。虽然患者Asp257Gly变异在已知的GBA基因变异库中未被报道,但无论是临床表现还是酶学及生物标记物特征,以及酶替代治疗的效果,均支持戈谢病的诊断,推断患者Asp257Gly纯合变异为临床致病性变异。本病例发现的新突变位点丰富了G...     

创新实验教学体系 促进实践能力培养

围绕微生物学在环保领域的应用, 以设计研究性实验为龙头, 构建具有专业特色的创新型教学体系, 实行开放式教学模式, 激发学生对环境微生物学的兴趣, 培养学生的创新性思维和解决环境问题的实践能力。     

微生物絮凝剂的稳定性及其对城市污水厂浓缩污泥的絮凝脱水

研究了酱油曲霉(Aspergillus sojae)产生的微生物絮凝剂(MBF)的稳定性,并将其用于城市污水厂的浓缩污泥的强化脱水.结果表明:由酱油曲霉提取的MBF具有很好的热稳定性和酸碱稳定性,4℃低温条件下保存35d后絮凝率仍在96%以上,而常温条件下保存35d后不同pH的MBF絮凝率差别很大.与PAM、PAC相比较,MBF能更好地降低城市污水处理厂浓缩污泥比阻.MBF对浓缩污泥的强化脱水的最佳投加量为7%(v/v),且MBF的单耗随着污泥处理量的增大而逐渐减小.     

生物吸附剂-活性污泥法吸附处理含铬电镀废水

研究了复合生物吸附剂FY01和活性污泥处理含铬电镀废水的吸附性能.结果表明,铬的生物吸附分为快速15g·L^-1污泥对通用电镀废水、康力电镀废水中铬的联合去除率分别高达97.7%和88.1%,比两者单独处理电镀废水的吸附和缓慢吸附两个阶段.FY01具有良好的吸附稳定性,对废水的pH适应能力强,当pH=2.5~6时,10g·L^-1FY01和5g·L^-1污泥曝气处理2000mL电镀废水2h后,68.6mg·L^-1含铬通用电镀废水中总铬的去除率达71.5~75.6%;50.1mg·L^-1含铬康力电镀废水中总铬的去除率高达80.0~90.0%.FY01和活性污泥具有良好的协同促进作用,10g·L^-1FY01和除铬率总和分别高出39.8%、44.6%.