大马勃水溶性多糖的结构研究

采用热水浸提,乙醇沉淀的方法得到大马勃粗多糖,经Sevag法脱蛋白,DEAE—sepharose fast flow离子交换层析及sephacrylS-300HR凝胶过滤法得大马勃多糖（CGPI-1）。气相色谱研究表明,其单糖组成为：Gal,Glc,Man等四种单糖,其中Gal,Glc,Man,摩尔比为3．92：11．28：1．22。经部分酸水解,红外光谱及核磁共振光谱,高碘酸氧化,Smith降解等分析,CGPI-1的主链由Man和Glc构成,存在β型和α型两种糖苷键构型,支链或主链的末端残基由β-Gal（1→4）,β-Glc（1→6）,α—Glc（1→4）构成,其分子中存在酰胺结构。原子力显微镜观察发现CGPI-1呈分支的线性分子,在水溶液中容易互相缠绕形成强大的网络结构。     

红毛五加多糖的基本性质研究

本文从红毛五加中分离得到了三种多糖,并对它们的基本性质进行了研究。红毛五加经热水浸提,用Sevag法脱蛋白,经DEAE-cellulcse 32离子交换层析和Sephacryl S-200HR凝胶层析纯化得到三个主要多糖组分：AHP-Ⅰ,AHP-Ⅱ和AHP-Ⅲ。HPLC测定AHP-Ⅰ、AHP-Ⅱ和AHP-Ⅲ的表观分子质量分别为7．0kD、59．5kD和12．9kD。红外光谱分析三种多糖具有多糖类物质的一般特征。经纸层析和GC结果综合分析得知,AHP-Ⅰ含有阿拉伯糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其摩尔比为1．00：1．40：0．64：3．13：2．09;AHP-Ⅱ含有鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其摩尔比为0．36：1．00：0．15：0．20：1．10;AHP-Ⅲ含有鼠李糖、阿拉伯糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其摩尔比为1．22：1．00：0．40：0．28：0．26：1．03。咔唑-硫酸法测得AHP-Ⅱ、AHP-Ⅲ的糖醛酸含量分别为6．7％和6．0％;AHP-Ⅰ不含糖醛酸。体内试验表明,红毛五加粗多糖对小鼠S180肉瘤有明显抑制作用。     

苦瓜籽蛋白的分离纯化及免疫原性分析

经过NaCl溶液匀浆抽提、硫酸铵分级分离、SP-Sepharose Fast Flow层析、Sephacryl S-100层析、Macro-Cap-SP层析,从苦瓜籽中同时分离纯化出大量的α-苦瓜素和苦瓜抗HIV蛋白30.经SDS-PAGE鉴定,二者均为单一条带,表观分子量为28 kDa.用两种蛋白分别免疫Balb/c...     

鬼臼多糖的分离纯化及其抗肿瘤活性

鬼臼经乙醚脱脂后用热水抽提,用蛋白酶法和Sevag法相结合除去蛋白质,乙醇分级沉淀,经DEAE－Sepharose和Superdex G-75或Sephacryl S-200HR柱层析纯化得到两种多糖组分EPS－A和EPS－B。经分析该两种多糖均为单一组分,用分子筛层析法测定了EPS－A和EPS－B的分子量分别为15kD和175kD。纸层析和气相层析分析得知,EPS－B含有木糖,阿拉伯糖,鼠李糖,葡萄糖,甘露糖和半乳糖,其摩尔比为0．37：2．20：0．57：9．83：1．0：3．42,而EPS－A中仅含葡萄糖,体内试验结果表明,EPS－B多糖对小鼠腹水肝癌细胞生长有一定的抑制作用。     

半枝莲多糖SPS_4组分的纯化性质及分析

半枝莲经热水提取,除蛋白质,乙醇沉淀,DEAE-纤维素及Sephadex G-150柱层析分离得到一种白色粉状多糖SPS_4。经琼脂糖电泳、玻璃纤维纸电泳及醋酸纤维素薄膜,凝胶柱层析证明SPS_4为均一性多糖。经进行完全酸水解后纸层析及气相层析分析确定糖基的组成及摩尔组成比为鼠李糖:岩藻糖:阿拉伯糖:木糖:甘露糖:葡萄糖:牛乳糖=0.22:0.26:1.0:0.09:0.51:1.82:2.09。平均分子量为10000。体外实验表明,多糖SPS_4对S-180肉瘤细胞及腹水肝癌细胞均有一定的抑制作用。     

乳糖诱导重组尿酸酶基因在大肠杆菌中的表达

对用乳糖替代异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组产朊假丝酵母尿酸酶基因在E.coli JM109(DE3)中表达进行了研究,拟建立一种高效低成本的生产重组尿酸酶的工艺路线。通过摇瓶试验对诱导所采用的乳糖浓度,诱导时机和诱导持续时间进行了优化,并考察在乳糖诱导下的目的产物表达动力学,随后在5 L发酵罐上进行扩大化培养以验证摇瓶优化的结果,进一步将乳糖作为诱导剂应用于高密度发酵过程。实验结果表明乳糖诱导的最佳浓度为5 g/L,最佳诱导时机是对数生长期中后期,诱导持续时间为9~10h;按照优化的条件在摇瓶和5 L发酵罐上进行分批培养,重组尿酸酶最大表达量可达菌体总蛋白的26%左右,可溶性蛋白的36%左右,略高于IPTG的诱导效果;高密度发酵过程菌体终密度达到OD600值40以上,尿酸酶表达量占菌体总蛋白25%左右。     

兔肌3-磷酸甘油脱氢酶的提纯及性质研究

目的:研究兔肌3-磷酸甘油脱氢酶的分离纯化方法及其酶学性质,为测定血清甘油三酯所用酶联试剂的开发提供试验基础和理论依据。方法:通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose、Blue-Sepharose和羟磷灰石纯化兔肌3-磷酸甘油脱氢酶,利用凝胶过滤和梯度PAGE(5%～15%)法测定酶分子量,采用常规酶学动力学分析方法,考察pH、温度、底物浓度以及部分金属离子与有机化合物对酶促反应的影响。结果 纯化后的兔肌3-磷酸甘油脱氢酶经PAGE(12%)分析为单一条带;酶分子量为115～122 kDa;酶最适温度45℃,最适pH 9;酸碱稳定范围pH6～9,低于45℃时热稳定性好;最适条件下,以3-磷酸甘油和NAD⁺为底物,测得酶的K_m分别为7.4×10^-3mol/L和1.47×10^-4mol/L;Ba²⁺、Mn²⁺、Fe²⁺、Al³⁺、Cu²⁺、Ni²⁺、Ag⁺、Hg²⁺、NaN₃、EDTA对酶有不同程度的抑制作用,Mg²⁺、Ca²⁺、Co²⁺、Zn²⁺有一定程度的激活作用,其中Co²⁺和Zn²⁺对酶的激活作用能达到200%以上,有机化合物NaF对酶的活性没有影响。     

川金丝猴胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因的克隆及序列分析

本实验从金丝猴肝脏细胞RNA中反转录得到cDNA,利用设计的引物M1和M2扩增IGF-Ⅰ基因,并将其克隆到pGEM-T载体上。经筛选、酶切、PCR鉴定、序列分析,证明该片段为金丝猴IGF-Ⅰ基因的cDNA克隆。该片段由521个核苷酸组成,其中包括一个完整的开读框（ORF）,编码一个由153个氨基酸组成的多肽。与GenBank中人、猪、鼠、马、牛、兔、山羊等哺乳动物的IGF-Ⅰ序列比较,其编码成熟肽序列的同源性从93．8％（马）到88．6％（鼠）,开放框序列的同源性从94．4％（人）到88．5％（鼠）。