PRRSV-PCV2重组病毒的构建及PRRSV转录调控机制的研究

目的 本研究旨在探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性cDNA克隆作为猪圆环病毒(PCV2)的主要免疫原开放阅读框架2(ORF2)表达载体的可行性,以及利用重组病毒对PRRSV复制转录过程进行解剖。方法 以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作,分别在pAPRRS的ORF1和ORF2间,ORF5和ORF6间,ORF6和ORF7间插入PCV2ORF2,且对拯救病毒vPCV进行了病毒学及分子生物学鉴定。结果 vPCV的sg mRNA2.1利用了PRRSV mRNA2的转录调控序列(TRS),形成由PRRSVGP2和PCV2衣壳蛋白组成的sgm RNA2.1。外源基因的插入同时也导致重组病毒启用新的TRS而产生3条新亚基因组,其中sgm RNA2.2和sgm RNA2.3采用PCV2上的序列来取代PRRSVRNA2本身的TRS;另一条sgm RNA2.4则为非经典型亚基因组,其TRS在PRRSV相应的AUG下游。结论 2株PRRSV-PCV2重组病毒可以稳定传代,为进一步研发PRRSV遗传标疫苗奠定了基础;插入片段上一些类似TRS序列的引入及插入片段(718bp)过长导致PRRSV ORF2 TRS 本身和其两翼序列的RNA结构变化是引起重组病毒遗传不稳定性的最主要原因； PRRSV可以利用TRS样外源序列作为转录启动子，这为进一步解剖PRRSV复制转录过程奠定了基础。     

PRRSV—PCV2重组病毒的构建及PRRSV转录调控机制研究

目的 本研究旨在探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性cDNA克隆作为猪圆环病毒(PCV2)的主要免疫原开放阅读框架2(ORF2)表达载体的可行性,以及利用重组病毒对PRRSV复制转录过程进行解剖.方法 以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作,分别在pAPRRS的ORF1和ORF2间,ORF5和ORF6间,ORF6和ORF7间插入PCV2 ORF2,且对拯救病毒vPCV进行了病毒学及分子生物学鉴定.结果 vPCV的sgmRNA2.1利用了PRRSV mRNA2的转录调控序列(TRS),形成由PRRSV GP2和PCV2衣壳蛋白组成的sgmRNA2.1.外源基因的插入同时也导致重组病毒启用新的TRS 而产生3条新亚基因组,其中sgmRNA2.2和sgmRNA2.3采用PCV2上的序列来取代PRRSV RNA2本身的TRS;另一条sgmRNA2.4则为非经典型亚基因组,其TRS在PRRSV相应的AUG下游.结论 2株PRRSV-PCV2重组病毒可以稳定传代,为进一步研发PRRSV遗传标疫苗奠定了基础;插入片段上一些类似TRS序列的引入及插入片段(718bp)过长导致PRRSV ORF2 TRS 本身和其两翼序列的RNA结构变化是引起重组病毒遗传不稳定性的最主要原因;PRRSV可以利用TRS样外源序列作为转录启动子,这为进一步解剖PRRSV复制转录过程奠定了基础.     

肌萎缩侧索硬化患者血清SOD、GSH-Px、MIP-1α、VEGF水平与肌电图特征及病程的关系研究

摘要 目的：研究肌萎缩侧索硬化（ALS）患者血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）水平与肌电图特征及病程的关系。方法：将从2018年12月起直至2020年12月,我院收治的ALS患者86例纳入研究,记作病变组。另取同期90例于我院进行体检的健康人员作为对照组。检测并比较两组血清SOD、GSH-Px、MIP-1α、VEGF水平及肌电图特征。将所有病变组患者根据病程的差异分为病程较长组42例以及病程较短组44例,比较两组血清SOD、GSH-Px、MIP-1α、VEGF水平以及肌萎缩侧索硬化症功能评分量表（ALSFRS-r）评分。采用Pearson相关性分析ALS患者血清SOD、GSH-Px、MIP-1α、VEGF水平与肌电图特征及病程的关系。结果：病变组血清SOD、GSH-Px水平均低于对照组,而MIP-1α、VEGF水平均高于对照组（均P＜0.05）。病变组各项肌电图参数水平均低于对照组（均P＜0.05）。病程较长组血清SOD、GSH-Px水平以及ALSFRS-r评分均低于病程较短组,而MIP-1α、VEGF水平均高于病程较短组（均P＜0.05）。经Pearson相关性分析可得：ALS患者血清SOD、GSH-Px水平与肌电图各神经符合肌肉动作电位（CMAP）、ALSFRS-r评分均呈正相关,与病程呈负相关（均P＜0.05）;MIP-1α、VEGF水平则与肌电图各神经CMAP、ALSFRS-r评分均呈负相关,与病程呈正相关（均P＜0.05）。结论：ALS患者血清SOD、GSH-Px水平较低,MIP-1α、VEGF水平较高,且和肌电图特征以及病程密切相关,值得临床关注。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆的构建

目的 确定"猪高热综合征"的主要病原是否为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),为探寻高致病性病毒基因组结构和功能、高致病性蓝耳病发病机制,以及进一步研制针对后者的基因工程疫苗奠定基础。方法 根据PRRSV基因组序列设计特异性引物,分5段扩增了高致病性PRRSV JX143株的全长cDNA,将各cDNA片段克隆到pBlueScriptⅡSK(+)载体中,进而利用重叠区中的单酶切位点将其连接成JX143株的全长cDNA克隆pJX143和含有遗传标记MluⅠ限制性内切酶的基因组全长cDNA克隆pJX143-M。结果全长cDNA克隆经体外合成RNA后转染MA-104细胞,均获得稳定的拯救病毒。通过比较亲本病毒与拯救病毒的病毒滴度、多步生长曲线和利用拯救病毒vJX143进行动物回归试验,结果 发现病毒学及生物学特性没有显著差异。结论 PRRSV的JX143株病毒确实是引起"猪高热综合征"的主要病原;建立了首个高致病性PRRSV的感染性cDNA克隆,证明拯救病毒与亲本病毒生物学特性相同。     

血管内支架介入成形术对老年缺血性脑血管病患者的神经功能、动脉血流速度及预后的影响

摘要 目的：探讨血管内支架介入成形术对老年缺血性脑血管病（ICVD）患者的神经功能、动脉血流速度及预后的影响。方法：选取2018年3月~2019年4月期间我院收治的117例老年ICVD患者作为研究对象,根据随机数字表法分为对照组（n=58）和研究组（n=59）,其中对照组患者予以保守药物治疗,研究组患者予以血管内支架介入成形术治疗,比较两组患者疗效、神经功能、动脉血流速度、预后及并发症情况。结果：研究组治疗6个月后的临床总有效率为91.53%（54/59）,高于对照组的72.41%（42/58）（P<0.05）。两组患者治疗后1个月、治疗后3个月、治疗后6个月美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分均下降（P<0.05）,且研究组低于对照组（P<0.05）。两组患者治疗后6个月大脑中动脉、基底动脉、颈内动脉血流速度均升高（P<0.05）,且研究组高于对照组（P<0.05）。两组患者治疗后1个月、治疗后3个月、治疗后6个月改良Rankin量表（mRS）评分呈下降趋势（P<0.05）,且研究组低于对照组（P<0.05）。两组患者并发症发生率对比未见统计学差异（χ²=2.261,P=0.133）。结论：老年ICVD患者经血管内支架介入成形术治疗后的疗效显著,可有效改善患者神经功能、动脉血流速度及预后,且不增加并发症发生率,具有较高的临床应用价值。     

帕金森病患者血清胱抑素C、β-淀粉样蛋白1-42检测的临床意义

目的:探讨帕金森病(PD)患者血清胱抑素C(Cys C)、β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)检测的临床意义。方法:选取2018年1月～2019年12月期间本院收治的帕金森病患者97例为研究对象纳入观察组,根据Hoehn-Yahr(HY)病情分期将观察组患者分为早期组(32例)、中期组(37例)、晚期组(28例),另选同期在我院进行体检的健康受试者50例为对照组。对各组受试者的血清Cys C、Aβ1-42、炎性因子、氧化应激指标等进行检测对比,并采用Pearson检验对PD患者的Cys C、Aβ1-42与炎性指标、氧化应激指标的相关性进行分析。结果:观察组血清Cys C、白介素-1β(IL-1β)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)水平均高于对照组,Aβ1-42、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平均低于对照组(P0.05)。在观察组内随着PD病情的加重,血清Cys C、IL-1β、CRP、TNF-α、MDA水平均逐渐升高,Aβ1-42、SOD、GSH-Px水平均逐渐降低,各组间对比差异有统计学意义(P0.05)。经Pearson检验分析,PD患者的Cys C与IL-1β、CRP、TNF-α、MDA呈正相关,与SOD、GSH-Px呈负相关,Aβ1-42与IL-1β、CRP、TNF-α、MDA呈负相关,与SOD、GSH-Px呈正相关(P0.05)。结论:PD患者血清中Cys C呈现高表达,Aβ1-42呈现低表达,其表达随着患者的病情加重而变化,并且与患者的炎症反应、氧化应激水平有密切的相关性。     

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)3′末端非翻译区中调控序列的研究

以北美株PRRSV感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,将3′UTR中的一级结构进行了系列缺失或插入突变,并改变二级结构中的一个保守的茎环结构,构建全长PRRSV突变体克隆,解析3′UTR突变对病毒感染性的影响,旨在界定调控PRRSV3′UTR的启动子序列及二级结构,即复制过程中的最小调控元件。以空斑和Northern blot来研究拯救后重组病毒的复制、转录和生长特性,发现重组病毒感染动力学与亲本病毒无可见差别。结果表明PRRSV3′UTR的5′端可耐受一定数目的核苷酸的缺失(41nt)与插入(23nt)突变,但进一步9nt缺失造成保守的环结构突变后就使病毒失去了感染性。证明了这是3′UTR中控制PRRSV复制过程的的必需序列及二级结构,为进一步解析PRRSV复制过程的调控元件奠定了基础。     

D-泛解酸内酯水解酶产生菌的筛选及产酶条件研究

筛选到一株产D-泛解酸内酯水解酶的菌株,经鉴定为串珠镶孢霉菌（Fusarium monili-forme)SW-902。产酶条件研究表明,用甘油作碳源,蛋白胨作氮源,初始pH8.0,温度26℃,摇瓶培养3d,产酶量最高,在60L发酵罐中通风发酵45h,产菌丝体生物量7.18g干菌体/L,D-泛解酸内酯水解酶酶活力达到0.92IU/g干菌体。     

猪繁殖与呼吸综合症病毒分子生物学研究进展

猪繁殖与呼吸综合症病毒是引起猪繁殖与呼吸综合症的病原体,本文对PRRSV的基因组结构、病毒的非结构蛋白和结构蛋白的及其功能的分子生物学研究进展做了简要综述.