Tropic1808基因的原核表达及其表达产物的生物活性

Tropic180 8基因是新近获得的一个鼠源性的cDNA .Tropic180 8基因开放阅读框架片段通过PCR方法从质粒中扩增后 ,重组入表达载体pET 2 1a中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) .用IPTG诱导目的蛋白的表达 ,SDS PAGE并凝胶图象分析确定目的蛋白表达水平占细菌总蛋白的 14%以上 .表达蛋白在N端融合有 16个氨基酸 ,将表达蛋白电转移至PVDF膜 .氨基酸序列分析表明 ,其N端第 17～ 2 5位氨基酸序列与Tropic180 8基因编码序列一致 .利用融合部分含T7·Tag ,通过亲和层析纯化表达蛋白 ,经Westernblot检测为目的蛋白 ,加入到无血清培养的新生SD大鼠背根神经节 (DRG)中 ,观察到表达蛋白对DRG具有促进存活和促进突起生长的作用 .     

坐骨神经缺损后大鼠近端神经新miRNA的鉴定与功能分析

周围神经系统在损伤后能够再生,再生过程中许多基因和蛋白的表达发生改变-miRNA是一类进化上高度保守、能够在转录后调控基因表达的非编码RNA．本研究聚焦在大鼠坐骨神经缺损后,近端神经新miRNA的鉴定和功能注解．通过深度测序、计算机分析和Q．PCR验证,98个新miRNA在坐骨神经缺损后的0,1,4,7和14天被发现和鉴定．进一步预测了这些miRNA的靶基因,分析了靶基因参与的生物学过程,结果显示靶基因参与的生物学过程与坐骨神经缺损后神经损伤和再生的过程基本一致．本实验为miRNA在坐骨神经缺损后的调控作用的研究提供了基础,有助于周围神经损伤和再生分子机制的进一步研究．     

神经诱向生长因子18kD蛋白的纯化

提取与纯化诱向生长因子是神经生物化学研究中的一个重要课题．采用自然系统凝胶电泳,分离周围神经损伤过程中产生的具有诱向生长作用的１８ｋＤ蛋白,再以等电聚焦凝胶电泳与神经组织联合培养,揭示了ｐＩ为５．２的１８ｋＤ蛋白具有诱神经生长的作用．经高效液相色谱仪分析获得较纯的１８ｋＤ诱向因子．蛋白／多肽测序仪检测,１８ｋＤ蛋白Ｎ端氨基酸序列为：ＰＥＰＡＷＳＡＰＡＰ．