毕赤酵母木糖还原酶定点突变改善其对双辅酶的亲和力

通过毕赤酵母(Pichia stipitis)木糖还原酶(xylose reductase, XR)基因定点突变,获得NADH高亲和力的毕赤酵母木糖还原酶(PsXR),改善了辅酶不同而导致的酿酒酵母胞内氧化还原失衡.同时克隆了PsXR编码基因,通过BLAST工具进行同源性搜索,并用生物软件进行序列比对和结构分析,确定突变位点.用融合PCR方法进行定点突变,并在大肠杆菌表达系统中进行融合表达,且对表达产物进行HIS-TAG亲和纯化,分光光度法检测酶活性,计算比活力.本研究成功获得突变XR编码基因,并收集了纯化的突变蛋白.酶活性检测和比活力计算显示,3种突变酶对2种辅酶的亲和力在一定程度上都发生了变化.与未突变的PsXR相比,3种突变酶对辅酶NADPH的亲和力均显著下降,突变酶M3对辅酶NADH的亲和力未发生变化,而突变酶M1和M4对辅酶NADH的亲和力显著升高,其中突变酶M1对NADH的亲和力明显提高,对NADPH的亲和力明显下降,其活性主要依赖辅酶NADH,提示K270R位点在XR与辅酶结合中起关键作用.     

呼吸内科病原菌的分布及耐药情况

目的：对十堰市人民医院2011年呼吸内科病原菌的分布及耐药情况进行研究,为临床合理使用抗菌药物及控制医院感染提供依据。方法：采用临床流行病学调查方法回顾性收集分析2011年1月-2011年12月呼吸内科病原菌分布及主要病原菌耐药率,对分离鉴定出的病原菌选用常用抗生素进行药敏实验,实验采用K-B法按NCCLS标准进行。结果：病原菌以革兰阴性杆菌为主,其中又以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌为主,革兰阳性球菌以金黄色葡萄球菌为主。产酶和不产酶肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌耐药率有明显差异。铜绿假单胞菌对头孢噻肟、氨曲南耐药率较高。结论：应根据药敏结果合理使用抗生素,以提高治疗效果,减少耐药菌株产生,预防医院内感染。     

基于特征选择和概率神经网络胃癌计算机辅助诊断

应用信噪比和概率神经网络的方法,结合实验数据,提出胃癌分类模型.它是利用已知信息对胃癌样本进行分析和判别.其方法是首先对数据进行分类信息指数信噪比分析,根据分类信息指数信噪比大小排序,然后采用特征向量递增的方法,将特征向量输入概率神经网络进行分析,采用留一法对PNN训练和检测,找出训练效果最好的特征向量子集.这种模型用MATLAB软件实现,具有可操作性,可推广到其它相应的疾病辅助诊断中去.     

一种通用的、基于Agent的生物资源整合架构

众所周知,随着基因组测序工作的蓬勃发展和后基因组时代的到来,生物信息学数据呈指数级增长.生物界在享受着资源共享所带来便利的同时,也随着数据总量和复杂性的不断增加而变得异构化和分布化.目前,各种生物计算软件和数据库资源通常标准不一而且很难兼容.因此,如何在这些异构资源之间实现数据集成与软件共享是有效利用生物信息资源的关键.为解决以上问题,本文提出了一种新型的数据整合架构,该架构通过将web服务与并行计算相结合的方法,轻松地实现了对异地资源数据的访问、提取、转化以及整合.实验证明,本系统在处理异构、海量数据方面有着巨大的计算潜力.     

大绿蛙Sox基因和Dmrt基因的序列分析

Sox基因家族与Dmrt基因家族在胚胎发育及性别分化中起着重要作用。采用PCR方法,扩增了大绿蛙Sox基因和Dmrt基因的保守区,分别获得长约220 bp和140 bp的片段。序列分析表明,大绿蛙雌雄个体之间Sox基因、Dmrt基因序列没有差异,与人和其它动物的Sox基因、Dmrt基因有非常高的相似性,显示了Sox基因及Dmrt基因在系统进化上的高度保守性。本研究为探讨大绿蛙的性别决定机制及Sox基因与Dmrt基因的进化提供了分子资料。     

基于谷氨酸棒杆菌NCgl1221蛋白的新型细菌表面展示系统

【目的】开发一种新型的大肠杆菌表面展示系统,为C末端截短NCgl1221蛋白作为锚定蛋白提供科学依据,丰富并优化细菌表面展示系统。【方法】扩增C末端截短NCgl1221序列和β-淀粉酶基因,构建融合蛋白表达载体。将重组载体PET-NA和空载体PET-28a分别转入Rosetta(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定融合蛋白表达情况。将诱导表达菌株进行免疫荧光染色,荧光显微镜观察和流式细胞分析检测β-淀粉酶的展示。酶活测定和淀粉水解分析验证被展示β-淀粉酶的活性。【结果】融合蛋白成功地在大肠杆菌中表达,有活性的β-淀粉酶通过与锚定蛋白C末端的融合被展示在了宿主菌表面,展示β-淀粉酶的重组菌可以水解利用培养基中的淀粉。【结论】成功开发了一种以C末端截短NCgl1221为锚定蛋白的新型大肠杆菌表面展示系统,并以此系统展示了分子量大小为56 kDa的活性酶,为该系统在全细胞催化剂或吸附剂等方面的应用奠定了基础。