微流控芯片检测肺癌患者血浆中p16基因异常甲基化在临床应用的评价

肺癌是常见的恶性肿瘤之一,其死亡率和发病率在世界范围的肿瘤性疾病中均居高不下.p16基因启动子区异常甲基化被认为是肺癌发生中的一起早期事件.为了提高检测异常甲基化方法的灵敏度及特异性,利用微流控芯片检测p16基因的异常甲基化,通过对肺癌患者血浆标本的检测,使病人血浆中的p16基因甲基化的异常改变可能成为辅助肺癌早期诊断和高危人群筛选的分子标记物,以期建立一种崭新而可靠的早期肺癌临床诊断方法.     

纳米四氧化三铁双歧杆菌LTA缓解溃疡性结肠炎的研究

目的探讨纳米四氧化三铁双歧杆菌脂磷壁酸(Fe3O4-LTA)复合物缓解溃疡性结肠炎(ulcerative coli-tis,UC)的情况。方法 100只Babl/c小鼠随机分为5组,即阴性对照组(N)、溃疡性结肠炎阳性对照组(UC)、0.1 mg/mL纳米Fe3O4-LTA缓解组(L)、0.5 mg/mL纳米Fe3O4-LTA缓解组(M)、1 mg/mL纳米Fe3O4-LTA缓解组(H)。N组不施加作用,UC组、缓解组(L组、M组、H组)用2%葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulphate,DSS)自由饮用2周,2周后UC组不施加作用,L、M、H组分别采用0.1 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL灌肠1 mL,每天1次,连续3周。观察临床体征和检测WBC、CRP、PCT、IL-18、IL-10。灌肠3周后处死小鼠,分离结肠黏膜上皮细胞,用RT-PCR法检测TLR2、TLR4的表达,用Western blot和免疫组织化学检测NF-κBp65的表达,组织病理切片评估缓解效果。结果纳米Fe3O4-LTA缓解1周后小鼠精神状态明显恢复良好,活动及进食增加,毛色有光泽。缓解组比UC组体重增幅大(P0.05);血液检测发现缓解组炎性指标不同程度下降,其中H组与其他组相比差异具有统计学意义(P0.05);RT-PCR检测显示:UC组与缓解组结肠黏膜上皮细胞内TLR2的表达要高于N组(P0.05),UC组TLR4的表达要高于N组和缓解组(P0.05)。NF-κBp65的Western blot和免疫组织化学染色显示UC组与缓解组的表达要高于N组(P0.05);病理组织切片和临床体征显示总缓解率达83.33%。结论纳米Fe3O4-LTA复合物具有较好缓解UC的能力。     

GeXP多重基因表达遗传分析系统在手足口病病原分型检测中的应用

利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立一种多重逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,同时检测引起手足口病的9种常见的人肠道病毒—人肠道病毒71型(HEV71)、柯萨奇病毒A组(CVA)16、4、5、9、10型和柯萨奇病毒B组(CVB)1、3、5型。优化多重反应体系中针对5’UTR区的肠道病毒通用引物和11对针对9种血清型人肠道病毒VP1区的特异性引物的浓度比例,分别以病毒细胞培养物和阳性粪便标本来验证多重反应体系的特异性,以TCID50定量的细胞培养物和克隆质粒体外转录的RNA梯度稀释液来检测多重检测体系的灵敏度。结果表明,优化后的多重检测体系,可扩增出人肠道病毒共有的保守片段的和型特异性片段,HEV71和CVA16细胞培养物的检测下限为100.5TCID50/μL,并可在103copies/μL水平同时、特异地检测出9种病毒RNA。该方法灵敏度高、特异性强,可快速对大量临床样本进行高通量检测,用于手足口病的分子流行病学调查。