脱氢表雄酮调节HepG2/GFP-HBx细胞p16基因甲基化及其与细胞周期和凋亡的相关性

目的探讨HBx与p16基因甲基化的关系,研究脱氢表雄酮（DHEA）对p16基因甲基化以及细胞周期和细胞凋亡的调节作用。方法以HepG2、HepG2/GFP和HepG2/GFP-HBx三种细胞为材料,采用MTT法检测细胞生长;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;MSP-PCR检测p16基因甲基化水平。比较分析HBx与p16基因启动子甲基化、DHEA与各检测指标的关系。结果HepG2/GFP-HBx细胞与HepG2细胞和HepG2/GFP细胞相比,细胞的增殖速度提高（P〈0.05）,G0/G1期细胞减少,S期细胞增多（P〈0.05）,凋亡率降低（P〈0.05）;HepG2/GFP-HBx细胞的p16基因启动子呈现高水平甲基化,HepG2和HepG2/GFP细胞呈现高水平非甲基化。100μmol/L的DHEA使三种细胞的增殖速度降低（P〈0.05）,G0/G1期细胞增加,S期细胞减少（P〈0.05）,凋亡率提高（P〈0.05）。DHEA可下调HepG2/GFP-HBx细胞的p16基因启动子甲基化水平,但对HepG2和HepG2/GFP细胞的p16基因启动子甲基化水平不产生影响。结论HBx引起肝癌细胞p16基因甲基化,并缩短细胞周期抑制细胞凋亡;DHEA可明显下调HBx引起的p16基因甲基化水平,延长细胞周期促进细胞凋亡,在无HBx基因整合的情况下,DHEA对肝癌细胞生长、细胞周期和凋亡的影响不通过p16基因甲基化的途径实现。     

云南白草岭鼠形小兽群落结构及垂直分布

对云南白草岭鼠形小兽群落结构,垂直分布及动物区系进行了调查,结果共捕获小兽21种1028只,隶属于啮齿目(Rodenria)鼠科（Muridae）10种,仓鼠科（Cricetidae)2种,松鼠科（Sciuridae)2种;食虫目（Insectivora）Juqin科（Soricdae)6种,鼹科（Talpidae)1种。其中东洋界15种,占71．43％,古北界4种,占19．04％,广布种2种,占9．53％,各个垂直带鼠形小兽群落物种多样性指数分别为,Ⅰ,云南松林及山坡耕作地带（2000－2650m)1.3814;Ⅱ。温凉性针阔叶混交林带（2650－3150m)1．6126;Ⅲ．苍山冷杉林带（3150－3500m)1．3488;Ⅳ。亚高山灌丛草甸带（3500－3657m）1．5085。云南白草岭优势种主要由齐氏姬鼠（Aopdemus chevieri)、中华姬鼠（A.draco)、大耳姬鼠（A.latronum)、大绒鼠（Eothenomys miletus)和昭通绒鼠（E.olitor)5种组成。     

组织因子膜外区融合蛋白基因的表达及产物的分离纯化与活性分析

 为构建表达组织因子 (TF)膜外区的融合载体 ,制备组织因子膜外区 ,抽提人胎盘组织的总RNA,通过 RT- PCR法扩增出 TF的 c DNA克隆至 p UC1 8并测定全序列 .然后以此为模板 ,再次PCR扩增出 TF膜外区 (soluble TF,s TF) c DNA,并将其插入到谷胱甘肽巯基转移酶融合表达载体 p GEX4T- 1 ,构建了 tac启动子控制下的 GST- s TF融合蛋白的表达载体 .表达的融合蛋白经亲和层析、凝血酶切得到纯化的 s TF.表达产物经 ELISA验证 ,能特异性地与 TF抗体结合 .重新脂化后 ,该产物具有较大凝血活性 .以上说明采用融合蛋白表达系统可以大量制备组织因子膜外区 ,为研制国产重组凝血活酶试剂和研究 s TF的结构和功能创造条件 .     

凝集素亲和层析研究人血清肝型碱性磷酸酶的糖链结构

用麦胚凝集素将人血清肝型和骨型碱性磷酸酶分离，再将肝型ＡＬＰ通过蔓陀萝凝集素亲和层析柱作醋酸梯度洗脱，发现正常人、急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌各组各自的混合血清ＡＬＰ的层析行为有明显差异。正常人只有不结合，而各种良性肝病出现数目不同（２－３个）的弱结合组分，肝癌则还出现３个强结合组分，各组分ＡＬＰ在不同肝病血清中的出峰时间基本恒定。这种ＡＬＰ洗脱峰的不均一性在单个病人血清中依然存在，是Ａ