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1.
The effect of transduction with a reverse fragment to a cDNA encoding human 6A8 α-mannosidase on apoptosis induction of human B cell line SKW6 by anti-Fas antibody was tested. Apoptosis-inducer of anti-Fas monoclonal antibody was used to induce apoptosis in SKW6 cells. Giemsa’s staining, Annexin-V-FLUOS staining and DNA ladder test were used to determine the events of apoptosis. Indirect immunofluorescent staining with anti-Fas antibody was performed to detect the surface Fas expression. In a time-course test of 12, 24 and 36 h for apoptosis induction by anti-Fas antibody, DNA ladder was observed in the wild-type SKW6 cells in a time-dependent fashion. Mock transduction had no effect on DNA ladder production. However, no DNA ladder was detected in the rAAV-antisense 6A8 cDNA-transduced SKW6. Results from Annexin-V-FLUOS staining on anti-Fas antibody-treated cells revealed that the staining-positive rate in the rAAV-antisense 6A8 cDNA-transduced SKW6 cells was decreased in comparison to that in the wild-type and the mock-transduced cells. Giemsa’s staining observation showed that the number of dying (with apoptotic bodies) and dead cells was reduced in the rAAV-antisense 6A8 cDNA-transduced SKW6 cells in comparison with that in the wild-type and the mock-transduced cells upon anti-Fas antibody induction. The transduction did not affect the expression of Fas molecular on cell surface. 100% cells in all the groups showed Fas expression. The SKW6 cells became resistant to apoptosis induction by anti-Fas antibody upon transduction with a reverse fragment to a cDNA encoding human 6A8 α-mannosidase. The transduction did not affect the expression of Fas molecule on cells.  相似文献   
2.
鉴于蛋白质糖基化的重要生物学意义, 以腺相关病毒为载体, 把编码6A8 a-甘露糖苷酶的cDNA 3′端1358 bp的反向片段转导入EB病毒转化的B细胞株SKW6, 探讨6A8 a-甘露糖苷酶表达抑制对抗Fas抗体诱导凋亡的影响. 反义6A8转导成功及表达用Northern杂交及RT-PCR检测, 6A8 a-甘露糖苷酶表达用Con A结合试验检测. Giemsa染色, AnnexinⅤ染色及梯形DNA电泳显示, Fas抗体能诱导SKW6细胞凋亡, 但6A8 a-甘露糖苷酶表达抑制的细胞对Fas抗体诱导的凋亡发生抵抗, 而转导正义6A8或空载载体则无影响. 6A8 a-甘露糖苷酶表达状况对SKW6细胞表面Fas分子表达没有影响.  相似文献   
3.
心脏压力负荷导致心肌肥厚的过程是心衰发生的关键环节。已有研究表明,控制心脏收缩的细胞钙致钙释放过程在心肌肥厚及心衰状态下发生缺损,但分子机制尚未阐明。我们以主动脉结扎手术建立压力负荷的大鼠心肌肥厚模型:实验组分为假手术组、代偿性肥厚组(CHT)和失代偿性肥厚组(DHT),以松钳一共聚焦成像技术研究单个L-型钙通道(LCC)与ryanodine受体(RyR)间的钙信号耦联。我们发现DHT中LCC—RyR分子耦联潜伏期延长49%,耦联成功率降低47%,失败概率提高72%,证明DHT进入了一种“分子间衰退”状态。出人意料的是,心功能正常的CHT也发生分子间衰退,并与锚定肌质网与细胞膜的junctophilin蛋白表达下降有关,表明分子间耦联衰退在细胞功能变化显现之前已经潜性地发生。与此一致,细胞兴奋期钙释放同步性降低,但钙释放总量和细胞钙瞬变在CHT并无变化。这些结果提示,在一个我们称为“稳定余量”(stability margin)的范围内,分子间耦联衰退不会影响细胞兴奋收缩耦联能力,只有分子间耦联衰退超出稳定余量,心衰才会发生。潜性的分子间耦联衰退的发现对早期防治心衰有重要意义。  相似文献   
4.
用 3D5细胞染色强阳性 ,而Daudi与Jurkat细胞染色弱阳性的单克隆抗体5D4,从一个人扁桃体细胞λgt1 1cDNA文库 (ATCCNo .375 46 )筛选到一个长 1 846bp的cDNA克隆 .RT_PCR显示 3D5细胞、Daudi细胞和Jurkat细胞 5D4mRNA均阳性 ,但 3D5细胞明显强于后两者 . 5D4cDNA中 88~ 1 2 0 9bp为一个开放阅读框架 ,编码374个氨基酸的蛋白质 .Northernblot分析结果和起始密码子前 5′端非编码区有 2个连续的终止密码子表明 ,这是一个全长cDNA .从其开放阅读框架推断的蛋白质的氨基酸序列中 2 95~ 334aa为一强疏水区 ,预测 31 3~ 334aa为一分值极高的跨膜螺旋区 ,其方向最可能是由膜内到膜外 .  相似文献   
5.
The effect of transduction with a reverse fragment to a cDNA encoding human 6A8 α-mannosidase on apoptosis induction of human B cell line SKW6 by anti-Fas antibody was tested. Apoptosis-inducer of anti-Fas monoclonal antibody was used to induce apoptosis in SKW6 cells. Giemsa's staining, Annexin-V-FLUOS staining and DNA ladder test were used to determine the events of apoptosis. Indirect immunofluorescent staining with anti-Fas antibody was performed to detect the surface Fas expression. In a time-course test of 12, 24 and 36 h for apoptosis induction by anti-Fas antibody, DNA ladder was observed in the wild-type SKW6 cells in a time-dependent fashion. Mock transduction had no effect on DNA ladder production. However, no DNA ladder was detected in the rAAV-antisense 6A8 cDNA-transduced SKW6. Results from Annexin-V-FLUOS staining on anti-Fas antibody-treated cells revealed that the staining-positive rate in the rAAV-antisense 6A8 cDNA-transduced SKW6 cells was decreased in comparison to that in the wild-  相似文献   
6.
遮荫对异株荨麻光合特性和荧光参数的影响   总被引:39,自引:3,他引:36  
刘悦秋  孙向阳  王勇  刘音 《生态学报》2007,27(8):3457-3464
系统研究了全光照和不同程度的遮荫(43%,58%,73%,87%,97%)对异株荨麻光合特性和荧光参数的影响。结果表明,异株荨麻的光补偿点和光饱和点均较低,且随着遮荫程度的提高,其值以及暗呼吸速率均依次降低。净光合速率日变化曲线呈单峰型,光合速率高峰值和日平均光合速率均随着遮荫程度的提高而明显下降。蒸腾速率和气孔导度的日变化与光合速率的日变化趋势一致,遮荫对蒸腾作用和气孔导度均有显著的影响,随着遮荫程度的提高,蒸腾速率和气孔导度均显著下降。在各光照条件下,蒸腾速率与气孔导度呈显著正相关。蒸腾速率和气孔导度与光合速率的相关性随遮荫条件的不同而异,全光照条件下蒸腾速率与光合速率呈显著正相关,而所有遮荫条件下相关性不显著。气孔导度与光合速率在所有光照下相关性均不显著。各遮荫条件下叶片总叶绿素、叶绿素a、叶绿素b含量均显著高于全光照的,且随遮荫程度的提高叶绿素含量呈上升趋势,而叶绿素a/b的值则随着遮荫程度的提高而下降。叶绿素荧光参数PSⅡ内禀光能转化效率(Fv/Fm)和潜在活性(Fv/Fo)日变化呈单谷曲线。各遮荫条件下Fv/Fm和Fv/Fo值均高于全光照的,且随着遮荫程度的提高其值均依次增加。这说明,异株荨麻是一种耐荫性很强的植物,遮荫可使其降低光补偿点、光饱和点、净光合速率、暗呼吸速率以及叶绿素a/b,但增加总叶绿素、叶绿素a、叶绿素b含量、光能利用率以及PSⅡ原初光能转化效率和潜在活性,以增强在弱光条件下的生长发育能力。  相似文献   
7.
新型降水分布数学模型研究及其应用   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
在分布式水文模型中,单元栅格内的降水输入是准确模拟各种水文过程的关键因素,寻求产生分布式降水数据的方法是水文模型研究的热点之一.在对国内外降水模型分析基础上,认为流域面上实际降水分布是天气系统降水与下垫面地形影响共同作用的结果,如果不受地形影响,天气系统降水的降水量等值线在平面上的分布近似为一组同心椭圆.根据这一原理,建立了一种能够模拟天气系统降水分布,并利用牛顿插值法对模拟结果进行地形影响修正的新型降水分布数学模型,提出了对降水中心位置及其中心降水量的模型模拟.利用黄土高原西川河流域实测资料对模型进行了检验,结果表明,该模型具有较高精度.由于模型概念简单明晰,且能指明降水中心位置及其中心降水量,因此在流域暴雨分析和洪水预报中具有一定价值.  相似文献   
8.
在病毒侵染和复制过程中,病毒与宿主之间存在广泛的蛋白质-蛋白质相互作用。本研究建立了一个小菜蛾幼虫cDNA文库,用于筛查与小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus,PlxyGV)蛋白相互作用的小菜蛾幼虫蛋白。pp31同源基因存在于所有鳞翅目昆虫杆状病毒。其编码产物是一种磷蛋白,与病毒基因表达调控相关。本研究通过酵母双杂交实验从小菜蛾幼虫cDNA文库中筛选出两个与PlxyGV PP31相互作用的蛋白质基因。序列分析结果显示这两个基因的预期编码产物分别是小菜蛾蛋白激酶C受体(RACK)和一种甲硫氨酰氨肽酶2(MetAP2)同源蛋白。原核表达和蛋白质纯化实验结果显示,rack与6-组氨酸编码序列的融合基因的表达产物是一个38kD多肽。在GST-pulldown实验中,RACK蛋白随同GST-PP31融合蛋白一起吸附于GST亲和树脂,进一步证实了小菜蛾RACK蛋白与PlxyGV PP31发生相互作用。  相似文献   
9.
小鼠皮肤癌变过程中GST—π免疫组化染色观察   总被引:1,自引:0,他引:1  
刘音  林敬连等 《细胞生物学杂志》2001,23(4):223-226,T001
为探讨谷胱甘肽s-转移酶(GSTs)在小鼠皮肤癌变中的作用,本实验利用GST-π抗体和免疫组织化学方法,观察GST-π在小鼠正常皮肤(n=6)、良性增生(n=8)、异性增生(n=12)、鳞状细胞癌(n=9)中的表达和作用部位.结果表明,在正常皮肤标本中GST-π几乎没有表达;在良性增生中,细胞质染色为50%,细胞核周染色为12.5%;在异性增生中细胞质染色为83.3%,细胞核周染色为75%;在鳞状细胞癌细胞质染色为100%,细胞核周染色为88.9%.GST-π在小鼠皮肤癌变过程中含量明显增高,尤其GST-π在皮肤角化层和核周的表达,可以作为诊断癌症的一种标志.  相似文献   
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