利用HRM技术区分ob糖尿病小鼠不同基因型

ob/ob小鼠是糖尿病相关研究中使用最广泛的动物模型之一,近年来,市场需求呈上升趋势。与野生型小鼠相比,其瘦素蛋白基因105号密码子发生CT点突变,导致不能产生正常的瘦素蛋白。该模型4周前外观表型与野生型无异,而ob/ob纯合子不育,因而在繁殖建系过程中,需要通过基因型鉴定纯合、杂合和野生三种基因型。该文建立了基于高分辨率溶解曲线分析(high resolution melting analysis,HRM)的基因型鉴定方法,基因型分型结果与常规PCR加酶切方法一致,也与DNA测序结果吻合;通过该方法分型后获得纯合子小鼠外观表型、血糖浓度参数符合预期。该方法较常规方法省时、高效、节省实验成本,可用于大规模ob小鼠繁殖中的基因型鉴定。     

小地老虎谷胱甘肽-S-转移酶AiGSTs1的分子特性及其对杀虫剂胁迫的响应

[目的]鉴定小地老虎Agrotis ipsilon sigma家族谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因,明确其编码蛋白质的催化活性,阐明该基因在小地老虎不同发育期、不同组织及在毒死蜱和高效氯氟氰菊酯胁迫下的表达模式,为深入探究小地老虎GST在杀虫剂解毒代谢中的功能提供理论基础.[方法]利用同源检索方法从小地老虎转录组中鉴定GST基因,利用原核表达系统表达重组蛋白并使用试剂盒检测其活性,使用实时荧光定量PCR技术分析基因的表达模式.[结果]从小地老虎转录组中鉴定了一个编码sigma家族GST的cDNA序列,命名为AiGSTs1.其编码的AiGSTs1蛋白含有谷胱甘肽结合位点和底物结合位点,具有GSTs的典型特征.在大肠杆菌中成功表达了重组AiGSTs1蛋白,测得此蛋白不仅具有谷胱甘肽转移酶活性,还具有过氧化物酶活性.毒死蜱和高效氯氟氰菊酯均可抑制重组AiGSTs1蛋白的活性.AiGSTs1在供试的小地老虎不同发育期和组织中均有表达,但在蛹期和幼虫脂肪体中表达量最高.使用LD5o剂量毒死蜱和高效氯氟氰菊酯处理小地老虎幼虫后,AiGSTs1的表达水平显著上升.[结论]本研究明确了小地老虎AiGSTs1的序列、所编码蛋白的活性和表达模式.毒死蜱和高效氯氟氰菊酯能够诱导AiGSTs1表达水平上调,表明该基因可能在这2种杀虫剂的解毒代谢中起重要作用.     

PKCα translocation from mitochondria to nucleus is closely related to induction of apoptosis in gastric cancer cells

PKCs have been implicated in the regulation of cellular differentiation, proliferation, apoptosis and signal transduction. It was demonstrated in this study that PKCα was located both at mitochondria and in cytosol in gastric cancer cell line BGC-823. Treatment of cells with 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA) resulted in the translocation of PKCα from both mitochondria and cytosol to nucleus as clearly shown by laserscanningconfocal microscopy, while the protein level of PKCα was not changed by TPA treatment as detected by Western blot. The results also revealed that TPA-induced translocation of PKCα was in close association with apoptosis induction, and such association was further affirmed by other experiments where various apoptotic stimuli and specific inhibitors of PKC were used. Taken together, these findings indicate that translocation of PKCα from both mitochondria and cytosol to nucleus in gastric cancer cell is accompanied by induction of apoptosis, and may imply a new mechanism of the potential linking between cell apoptosis and PKCα translocation.     

香菇品种杂交的研究——Ⅱ.出菇试验

本试验着重观察前报杂交所得部分异核体和它们的亲株,在室内外产生子实体(出菇)的结果,现报道如下。     

快速准确监测奶牛体细胞数的方法

实验通过荧光染色的方法,运用荧光显微术对3个取样点总计39头奶牛的体细胞在不同时间计数,表明吖啶橙染色是一种快速、准确的监测奶牛体细胞数的方法,同时还表明不同的饲养条件及管理会造成牛群健康状况的显著差异,并依据实验结果对改善牛群的健康状况提出了建议。     

PKCα translocation from mitochondria to nucleus is closely related to induction of apoptosis in gastric cancer cells

PKCs have been implicated in the regulation of cellular differentiation, proliferation, apoptosis and signal transduction. It was demonstrated in this study that PKCa was located both at mitochondria and in cytosol in gastric cancer cell line BGC-823. Treatment of cells with 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA) resulted in the translocation of PKCa from both mitochondria and cytosol to nucleus as clearly shown by laser-scanning-confocal microscopy, while the protein level of PKCa was not changed by TPA treatment as detected by Western blot. The results also revealed that TPA-induced translocation of PKCa was in close association with apoptosis induction, and such association was further affirmed by other experiments where various apoptotic stimuli and specific inhibitors of PKC were used. Taken together, these findings indicate that translocation of PKCa from both mitochondria and cytosol to nucleus in gastric cancer cell is accompanied by induction of apoptosis, and may imply a new mechanism of th     

稻纵卷叶螟羧酸酯酶基因的鉴定与表达谱分析

【目的】鉴定稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis的羧酸酯酶基因,并检测这些基因在成虫不同组织中的表达模式。【方法】从稻纵卷叶螟转录组中搜索羧酸酯酶基因,使用生物信息学软件对所获得的基因序列进行分析,使用荧光定量PCR检测这些基因在各组织中的相对表达水平。【结果】获得了15个羧酸酯酶基因,分别命名为Cm Car E1~Cm Car E15。其中Cm Car E12缺少3′区域,其余14个序列均含有完整的开放阅读框。除Cm Car E11外,其余14个基因编码的蛋白均具有羧酸酯酶的典型特征,如保守的五肽结构域,催化三联体和氧阴离子穴等。系统进化分析显示15个Cm Car Es被聚在不同的进化支内,Cm Car E13、Cm Car E14和Cm Car E15聚在"胞内催化类"进化支,其余12个Cm Car Es聚在"分泌催化类"进化支。Cm Car E1、Cm Car E2、Cm Car E3、Cm Car E7、Cm Car E8、Cm Car E10和Cm Car E13特异表达于成虫腹部,而Cm Car E9特异表达于雌雄成虫触角。其他基因的表达没有组织特异性。【结论】Cm Car E1、Cm Car E2、Cm Car E3、Cm Car E7、Cm Car E8、Cm Car E10和Cm Car E13编码的酯酶可能参与了内外源化合物的代谢,而Cm Car E9编码的酯酶可能参与了气味分子的降解。     

大亚湾养殖鱼类寄生车轮虫的种类组成与季节动态

2017年8月至2018年7月对大亚湾8种养殖鱼类的车轮虫感染情况进行了调查, 采用Lom倡导的“统一特定方法”及Van As & Basson提出的“齿体定位描述法”对采获的车轮虫标本进行了形态鉴定与描述。结果在卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)、星点笛鲷(Lutjanus stellatus)、鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)、眼斑拟石首鱼(Sciaenops ocellatus)和虎龙杂交斑[E. fuscoguttatus (♀) × E. lanceolatus (♂)]等5种鱼上共检获5种车轮虫: 亚卓车轮虫(Trichodina jadranica)、莱普斯车轮虫(T. lepsii)、长须鳠车轮虫(T. guliae)、劳牧小车轮虫(Trichodinella lomi)和斜拟车轮虫(Paratrichodina oblique); 其中卵形鲳鲹5种虫均有寄生, 虎龙杂交斑感染了4种虫, 星点笛鲷、眼斑拟石首鱼和鞍带石斑鱼分别感染了3种、2种和1种虫。周年感染数据表明: 5种虫的感染率均以卵形鲳鲹最高, 眼斑拟石首鱼上2种虫的感染率最低; 莱普斯车轮虫平均感染强度最高的宿主是虎龙杂交斑, 其他4种虫的均是卵形鲳鲹。寄生车轮虫的季节动态表明: 冬季的感染率和平均感染强度较低; 不同虫种感染高峰出现的季节不一, 其中斜拟车轮虫的感染高峰出现在秋季, 其春夏秋季的平均感染强度均大于其他4种虫。研究填补了大亚湾海区鱼类寄生车轮虫研究的空缺, 为该海区车轮虫病的诊断与防控提供了参考。     

PKCγ免疫反应定位小鼠皮质脊髓束的实验研究

目的探讨显示皮质脊髓束在成年小鼠脑和脊髓中定位分布的简便有效方法。方法运用蛋白激酶Cγ（PKCγ）免疫组织化学染色法,观察成年ICR小鼠脑和脊髓中皮质脊髓束的定位和分布情况。结果PKCγ免疫阳性产物分布于大脑运动皮层第V层锥体细胞胞体和轴突中,锥体细胞的阳性纤维经内囊、中脑大脑脚底、脑桥基底部、下行至延髓锥体中。在延髓下段,PKCγ阳性纤维经锥体交叉后进入对侧脊髓灰质后联合背侧,形成背侧皮质脊髓束,在脊髓白质的后索腹侧深层下行,至骶髓3-4节段以下逐渐消失。在整个脊髓前索和外侧索中未见有PKCγ阳性纤维。结论PKCγ特异地表达于脊髓后索皮质脊髓束中,提示PKCγ免疫组织化学法是一种显示和观察皮质脊髓束精确定位的有效方法。     

大蜡螟成虫3个醛氧化酶基因的鉴定、序列特征与组织表达模式

醛氧化酶(AOXs)在昆虫的嗅觉生理代谢过程中起重要作用.本研究从大蜡螟Galleria mellonella成虫中鉴定了3个AOXs基因,命名为GmelAOX1、GmelAOX2和GmelAOX3.这3个基因均含有完整的开放阅读框,所编码的蛋白质均具有醛氧化酶的典型特征,如具有铁硫氧化还原中心、黄素腺嘌呤二核苷酸结合区域和钼辅因子结合区域.系统进化分析显示3个GmelAOXs被聚在不同的进化分支,且GmelAOXs与鳞翅目AOXs亲缘关系最近.GmelAOX1和GmelAOX3位于同一个基因组框架(scaffold69)上,而GmelAOX2位于scaffold96.GmelAOX1、GmelAOX2和GmelAOX3的外显子数量分别为17个、16个和21个.GmelAOX2高量表达于成虫触角,且在触角中的表达量显著高于其它组织,推测GmelAOX2可能编码一个气味降解酶并参与醛类气味分子的降解.GmelAOX1和GmelAOX3的表达没有组织特异性,二者编码的蛋白可能兼具气味降解和外源醛类代谢的功能.