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1.
用激光微束穿刺法转化甘蓝型油菜小孢子的研究   总被引:20,自引:0,他引:20  
建立了油菜小孢子再生胚状体的实验体系,掌握了受体最佳发育时期,使再生频率高达21.2个胚状体/花蕾。以油菜游离小孢子为受体,用微束激光穿刺法导入芜菁花叶病毒外壳蛋白基因(TuMV),成功地获得了转基因植株。研究结果表明,用预培养3天的小孢子进行转化得到的15个胚状体,再生出一株绿苗,2株白苗。而未经预培养的小孢子未能得到转基因植株。用植物总DNA以PCR法扩增TuMV基因产物片断,然后进行电泳检测,证明该绿苗带有芜菁花叶病毒外壳蛋白基因。  相似文献   
2.
甘蓝型油菜游离小孢子培养的胚胎发生   总被引:33,自引:0,他引:33  
以生长在非控温控光下的4个冬性甘蓝型油菜(BrassicanapusL.)品种为供体,进行游离小孢子培养。研究发现,多数品种在开花3-7天取材最为适宜。在甘蓝型油菜小孢子培养中只有单核晚期的小孢子才可能发育成胚状体,而花药培养时处于单核早期的小孢子易于发育成胚状体。在适当花期选取发育比较一致的单核晚期小孢子培养,经数小时后,部分小孢子便开始膨大,这是小孢子发育成胚的最早标志,膨大的小孢子中,有部分形成多细胞球并进一步发育成胚。用春性甘蓝型油菜为材料进行蔗糖浓度的实验结果表明:培养3天后,在16%蔗糖培养基中存活的小孢子最多,达16.13%;培养30天后,胚状体诱导频率则以13%蔗糖浓度为最高,每花蕾可达144个胚状体。如果在16%蔗糖培养基中培养3天后,添加等体积的13%蔗糖培养基,能够大大提高胚状体的诱导频率,为仅用13%蔗糖培养基培养的3.7倍。这一实验体系正在用于抗菌核病的诱变与筛选,并作为外源基因导入的实验体系。  相似文献   
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