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1.
旨在建立获得融合蛋白GPR81-Gi1α的方法和最优条件。采用RT-PCR从人胚胎肾及大脑组织总RNA中分别扩增孤儿G蛋白偶联受体GPR81和Gi1α的完整表达序列(分别为1 041bp和1 065bp),并构建各自的重组质粒pcDNA3.1(+)-GPR81及pcDNA3.1(+)-Gi1α,再以重组质粒为模板,运用重叠延伸PCR法扩增得到融合基因GPR81-Gi1α,测序无误后将融合基因与pFASTBac1重组得重组质粒pFASTBac1-GPR81-Gi1α,而后转化DH10Bac,使该融合基因重组质粒发生特异性的转座和病毒重组,获得杆状病毒表达穿梭质粒pBacmid-GPR81- Ci1α,再将该重组杆粒转染昆虫sf9细胞,获得含杆状病毒的细胞分泌上清,以上清在不同条件下(包括不同感染时间、滴度等)感染sf9细胞以优化融合蛋白在昆虫sf9细胞的表达条件。结果表明,感染72h且感染强度moi为5时是融合蛋白在sf9细胞中高效表达的理想条件。该表达体系的建立及蛋白表达条件的优化,保证了足量GPR81- Gi1α融合蛋白的制备。  相似文献   
2.
To investigate whether an erythropoietin (EPO) gene-based therapy could serve as an alternative to the repeated injection of rhEPO in treatment to renal anemia, the genetically modified myoblasts of rats, named Myo/ EPO, were implanted through intramuscular injection to model rats with renal anemia. The hemoglobin (Hb) and hematocrit (HCT) of the rats increased from (92. 5±3.0) g/L and 0.29 ±0.04 to the peak values of (103.8 ±5.0) g/L and 0. 32 ±0. 04 respectively 14 d after implantation, and sustained the pre-implantation level for 90 d. Otherwise, the control rats implanted with Myo/X, which carried the parent retroviral vector, gradually became severe in anemia. The PCR detection for hEPO cDNA in the rat muscle adjacent to injection sites indicated that the Myo/EPO cells survived for a long period in the muscle of rats. The results primarily demonstrate that myoblast gene transfer of EPO is effective for the treatment of rat renal anemia.  相似文献   
3.
人源孤儿G蛋白偶联受体hGPCRc的分子克隆及其初步鉴定   总被引:3,自引:0,他引:3  
孤儿G蛋白偶联受体 (orphanGprotein coupledreceptors ,oGPCRs)是最重要的潜在药物靶点 ,对于创新药物研究意义重大 .根据已有文献及相关基因数据库提供的信息 ,利用RT PCR从人结肠组织获得oGPCR某一成员的氨基酸编码序列 ,大小为 10 14bp ,而且与GenBank已登录序列(AB0 835 98)完全一致 ,称之为hGPCRc ;又用相同的引物以健康志愿者血液基因组DNA作为模板进行PCR扩增 ,亦得到同样大小的DNA序列 ,测序显示二者个别碱基不一致 ,但所对应氨基酸序列并无差异 .另外 ,RT PCR对人源部分组织及细胞系的检测结果显示 :hGPCRc在人脑组织表达最高 ,结肠次之 ,其它组织或细胞系如胃、血液、肝、肺、上皮未检测到该基因的表达 .利用相关软件对hGPCRc分别结果显示 :hGPCRc定位于人染色体 13q32 3,与小鼠、大鼠的对应物序列同源性高达85 % ,但与人源其他已知基因的同源性较低 ,对应的氨基酸序列组成了 7个跨膜区段的结构域 .因此 ,hGPCRc符合GPCR的结构特点 ,应为人类oGPCRs的新成员 .  相似文献   
4.
生物信息学的飞速发展为孤儿G蛋白偶联受体(orphan G protein—coupled receptors,oGPCRs)配基的筛选提供了重要的信息资源。利用生物信息学数据库和工具对oGPCRs的核酸和蛋白质序列进行运算、分析、注释和预测,获得足够的生物信息,辅助实验研究,以尽可能快速、准确地筛选出oGPCRs的特异性配基。本介绍有关生物信息学在oGPCRs配基筛选研究中的应用。  相似文献   
5.
生长因子及细胞因子的两条重要信号转导通路   总被引:4,自引:0,他引:4  
业已发现的大部分生长因子受体具有酪氨酸激酶活性,其信号传递以Ras通路为主;而多数细胞因子受体本身缺乏酪氨酸激酶活性,其信号传递过程通过JAKs及STATs两个重要的蛋白质家族的介导得以实现.信号转导通路的研究,对于认识各种生长因子及细胞因子的作用机制具有重要意义.  相似文献   
6.
利用比色法、竞争性蛋白结合技术及放射性免疫分析法,分析热环境中负重行军战士血液乳酸含量、cAMP、cGMP及皮质醇含量,以探讨热应激过程中机体的生化变化特点,并观察阿的平对这些变化的影响。结果表明:行军后战士血液乳酸浓度、皮质醇含量(2.08±0.18mmol/L、16.25±1.05μg/100mL)较行军前(1.62±0.16mmol/L、14.98±0.9μg/100mL)明显升高,而行军后血浆cAMP浓度(18.8±3.9pmol/mL)则较行军前(32.9±6.0pmol/mL)显著降低,cGMP在行军前后无明显变化;行军前预服阿的平,具有减弱或逆转上述变化的作用。  相似文献   
7.
孤儿G蛋白偶联受体hGPCRc的亚细胞定位及组织分布   总被引:2,自引:0,他引:2  
利用相关生物信息学软件,对从人结肠组织克隆所得某一孤儿G蛋白偶联受体(orphanGprotein_coupledreceptors ,oGPCRs)成员hGPCRc的氨基酸序列进行分析显示,hGPCRc对应的氨基酸序列组成了七个跨膜区段的结构域,具备GPCR的结构特征;然后,将hGPCRc之cDNA与绿色荧光载体pEGFP-N1 构建GFP_hGPCRc表达载体,以空白质粒pEGFP-N1 作对照,转染CHO-K1 细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下观察到空白质粒pEGFP-N1 转染的细胞表达了GFP并均匀分布于整个细胞,而GFP_hGPCRc转染的细胞观察到荧光清晰聚集于细胞膜和各细胞器质膜上,因而hGPCRc蛋白定位于膜上并稳定表达,与软件分析结果相一致;最后,以RT_PCR检测hGPCRc在2 0周龄胎儿重要组织器官及部分成人组织中的表达情况,结果显示hGPCRc在人心、肾、小脑及结肠等组织均有表达,但在肝、大脑、小肠及肌肉等组织里未检测到表达。该表达谱对于进一步认识hGPCRc在胚胎发育中的作用及生理功能提供了线索。  相似文献   
8.
以前研究表明,热应激可使大鼠肺组织细胞膜肾上腺素能受体明显下调、膜磷脂分解代谢加速。本研究观察了阿的平(磷脂酶A2的非特异性抑制剂)对β-肾上腺素受体及膜磷脂代谢的调节作用和对机体热损伤的防护作用。结果表明,阿的平对热应激造成的β-受体的下调、磷脂分解的加速具有明显的抑制作用,并能明显提高大鼠和人对热应激的耐受能力。  相似文献   
9.
采用PCR技术分别从人全血基因组DNA及引产胚胎肾组织cDNA中扩增得到gpr81的全长cDNA序列(1041bp),运用生物信息学手段绘制该基因的分子进化树,显示该基因的氨基酸序列与烟酸受体同源性最高;然后,采用RT-PCR法分析该基因表达的组织分布,组织表达谱显示该基因在多种组织均有表达,以心脏及肝脏组织为最高;利用分子克隆手段构建含6×组氨酸(His)标签蛋白的真核表达载体pcDNA3·1(-)/his-myc-A-gpr81,通过脂质体介导,将该重组质粒转染CHO-K1细胞,RT-PCR证实该基因已整合入CHO-K1细胞的基因组中,Western-blot表明GPR81在CHO-GPR81工程细胞株中有表达。组织表达谱的检测和工程细胞株的建立为进一步研究该受体的生物学功能奠定了基础。  相似文献   
10.
以放射性配基结合分析法对正常成年小鼠大脑皮中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体作了鉴定;观察了衰老小鼠NMDA受体、空间辨别能力、海马突触传递长时程增强的变化及补肾中药复方对这些变化的影响。结果表明:小鼠大脑皮质含有丰富的、高亲和力的NMDA受体;衰老过程中小鼠NMDA受体的最大结合容量Bmax)呈渐进性降低,空间辨别能力下降,LTP的振幅和斜率明显降低;补肾中药复方具有提高衰才小鼠NMDA受  相似文献   
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