苏云金芽孢杆菌科默尔亚种15A3株的cry基因分析及杀虫特性

筛选的苏云金芽孢杆菌野生菌株15A3经鉴定属血清H21型科默尔亚种。用PCR及RFLP方法对其cry1类基因分析证明其含有cry1Aa,\%cry1\%Ac,\%cry1\%Ca,\%cry1\%D,\%cry1\%I及cry2六种cry基因,其cry1A基因N末端145kb片段与已发表的序列有差异。表达晶体蛋白质的分子量分别为130,79,70,65,51和45kD。对家蝇致畸实验证明其不含β外毒素。发酵液对棉铃虫,甜菜夜蛾,小菜蛾及美国白蛾均具较高的毒力。证明野生的苏云金芽孢杆菌资源中也有具国外工程菌所特有的高效杀虫晶体蛋白基因组合的优良菌株。     

苏云金芽孢杆菌的电穿孔及其工程菌的构建

本文对苏芸金芽孢杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,Ｂｔ)和蜡状芽孢杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ,Ｂｃ)等部分菌株的电穿孔转化进行了研究 ,主要从电穿孔的供体质粒和受体菌株等方面讨论了各种因素对该方法的影响。同时利用电穿孔方法对部分Ｂｔ的高效野生株进行遗传改良 ,希望获得含有ｃｒｙ1Ａｃ和ｃｒｙ1Ｃ高效基因组合的对鳞翅目棉铃虫、甜菜夜蛾都有效的广谱工程株。利用质粒 ｐＳＢ1 40 2 (ｃｒｙ1Ｃ) ,ｐＡＭＹ(ｃｒｙ1Ａｃ) ,ｐＮＱ1 2 2 (Ｃｍｒ)对所有的供试菌株进行电穿孔转化 ,不同菌株表现出不同的转…     

韭蛆病原菌cyt基因的克隆及工程菌株的构建

以Ｇｅｎｅｂａｎｋ中收录的来自Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｅｎｓｉｓｓｕｂｓｐ .ｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ(Ｂｔｉ)的ｃｙｔＡ基因序列为依据 ,设计了特异性的引物 :ｃｙｔＡ1和ｃｙｔＡ2 ,对从四川成都分离的韭蛆病原菌Ｂ .ｔＴＮ 189用ＰＣＲ方法扩增到 982ｂｐ的ｃｙｔ基因片段。利用设计的酶切位点将此片段用ＨｉｎｄⅢ /ＸｂａⅠ进行双酶切后 ,与克隆载体 ｐｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ( /- )连接 ,转化Ｅ .ｃｏｌｉＪＭ 10 9,通过蓝白菌落的筛选 ,挑出转化子 ,并通过ＰＣＲ和酶切验证了转化子的正确性。将重组子命名为ｐｂｌ ｃ…