池蝶蚌组织蛋白酶L基因的组织表达及免疫应激分析

应用cDNA文库筛查及同源片段克隆拼接技术,克隆了池蝶蚌组织蛋白酶L(Hs-CtsL)cDNA基因全长序列(GenBank注册号为JN604558)。其cDNA全长1152 bp,5′-非翻译区(Untranslated Region,UTR)长1 bp,3′-UTR长149 bp包括1个多聚腺苷信号AATAAA和Poly(A)尾巴,开放阅读框(Open reading frame ORF)为1002 bp,编码333个氨基酸组成的多肽链。其分子量约37.7 kD,理论等电点为7.16,包含信号肽、前体域和成熟域。系统进化分析显示,Hs-CtsL同无脊椎动物组织蛋白酶L聚为一支,且同三角帆蚌亲缘关系最近,其次为褶纹冠蚌。组织表达分析结果显示,池蝶蚌组织蛋白酶L在肠、鳃、性腺、外套膜、斧足、闭壳肌、血细胞、肝胰腺、肾和心脏均有表达,其中血细胞中表达量最高。应激实验表明,经嗜水气单胞菌刺激后,Hs-CtsL在血细胞、鳃、肝胰腺和外套膜中的表达量显著上调。其中在肝胰腺中刺激后6h表达量到达峰值,在血细胞、鳃和外套膜中的表达模式近似,表现为一个波动变化,在4h、12h和48h被上调。结果暗示着Hs-CtsL除参与了池蝶蚌血细胞的先天性免疫防御以外,还参与了其消化腺免疫器官的免疫应答反应。     

Rpf蛋白：一种激活休眠状态放线菌的复苏促进因子

放线菌能产生多样性丰富的小分子化合物，但大多数放线菌因为处于“活的尚未培养”状态而无法分离培养。造成“活的尚未培养”状态的原因之一可能是由于一些环境因素，例如有机物、重金属、抗生素等胁迫使细胞处于休眠保护状态，直到遇到适宜的条件才能继续复苏生长。复苏促进因子（Resuscitation-Promoting Factor，Rpf）是由某些放线菌分泌的一类蛋白质，首次在藤黄微球菌（Micrococcus luteus）中发现，之后人们对Rpf蛋白的功能和分布给予了更多的关注。Rpf蛋白能促进一些休眠的革兰氏阳性细菌复苏，这为“活的尚未培养”放线菌的分离培养提供了可能性。同时，针对一些致病放线菌物种，开发Rpf蛋白抑制物为相关疾病的治疗也提供了一条新的途径。基于此，本文对Rpf蛋白的结构组成、特征功能、作用机制及应用前景进行了简要的概述。     

液相色谱-高分辨串联质谱法测定奶粉中A2 β-酪蛋白及β-酪蛋白与乳清蛋白含量关系的研究

目的：建立奶粉中A2 β-酪蛋白分离定量的液相色谱-高分辨串联质谱法，并利用婴儿配方奶粉中酪蛋白、乳清蛋白和总蛋白含量的关系，间接得到乳清蛋白含量。方法：样品经前处理后，采用ACQUITY UPLC HSS T3柱（100 mm×2.1 mm×1.8 μm），0.1%甲酸-水和乙腈为流动相，梯度洗脱分离。多反应离子监测模式定量测定其中的A2 β-酪蛋白特征肽。结果：在0.02~2.0 μmol/L范围内线性关系良好（r=0.993 8）。在低、中、高三水平加标试验中，回收率在94.9%~98.7%，相对标准偏差在1.7%~3.7%，检出限为0.80 mg/100 g，可满足对奶粉中A2 β-酪蛋白定量要求。采用该法对市售11批声称A2奶粉和18批未声称A2奶粉（以下简称A2奶粉和普通奶粉）中A2 β-酪蛋白进行测定。结论：A2奶粉中A2 β-酪蛋白占总β-酪蛋白含量的86.2%~98.7%，而普通奶粉则低至20.0%~50.0%。另外，乳清蛋白含量的间接测定值和理论计算值经统计分析，无明显差异（P>0.05），为分析婴儿配方奶粉中乳清蛋白含量是否符合国标要求提供参考。