从国内现有菌株制备磷酸转乙酰酶

磷酸转乙酰酶(PTA),最早由Stadtman用克氏梭状孢子杆菌制备,但菌体培养烦难。1967年和1970年,Abiko报道了由大肠杆菌B制备PTA,并用以测定辅酶A。我们在Abiko工作的基础上,用大肠杆菌1.505制备PTA,获得较好的结果。大肠杆菌1.505菌种,是由中国科学院微生物研究所提供的。菌体培养条件如下:斜面培养基的成分是:1％蛋白胨,0.5％氯化钠,2％琼脂加蒸馏水至1,000毫升,趁热用绢布或纱布过滤分装,121℃,15磅灭菌30分钟,在无菌操作下将大肠杆菌1.505-环接种到斜面培养基上,37℃培养15小时。种子培养基的成分是1％葡     

不结球白菜BcMPK4基因的分离及表达

为了进一步探讨植物MAPKs(mitogen-activated protein kinases)在植物防卫中的作用,该研究从不结球白菜抗病品种‘苏州青’中克隆到一个抗核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)相关基因,命名为BcMPK4(DDBJ登录号AB557751)。该基因核苷酸序列全长1 334bp,编码373个氨基酸,与已克隆的MPK4基因有不同程度的相似性。系统进化树分析表明,该基因在不同物种之间具有保守性。基因组DNA杂交表明,BcMPK4可能属于一个较小的多基因家族,属组成型表达。实时定量PCR检测表明,核盘菌能够诱导不结球白菜BcMPK4基因的转录表达;BcMPK4基因在不结球白菜叶片中的表达特征说明它可能参与寄主对核盘菌的抗性。     

桉树木栓形成层脱落期间抗氧化物酶活性与DNA动态分析

以桉树品种‘3229’和‘U6’的木栓形成层为材料,比较分析了其从形成到脱落期间,3种抗氧化物酶(POD、SOD、APX)和LOX的活性,以及叶绿素、MDA、H2O2和DNA含量的动态变化.结果显示:随着2个品种木栓形成层衰老的加剧,叶绿素的含量均下降,但MDA含量、H2O2含量和LOX活力均增加.品种‘3229’木栓形成层成熟期的SOD活性显著高于形成期和脱落期,但形成期与脱落期的酶活性却无显著差异;品种‘U6’木栓形成层成熟期SOD的活性也为最高,但各时期间的SOD活性差异不显著.品种‘3229’和‘U6’的木栓形成层从形成期到成熟期APX活性均呈显著增加趋势,但成熟期后活性均又呈下降趋势.品种‘3229’木栓形成层的POD活性在成熟期到脱落期期间显著增加,而品种‘U6’却在形成期到成熟期显著增加.两品种DNA的动态分析电泳结果表明,桉树木栓形成层的脱落很可能包括细胞程序化死亡过程(PCD).     

人IA-2基因的部分区段克隆表达及其在1型糖尿病诊断中的应用价值评估

目的:构建人IA-2基因不同区段原核表达载体,诱导表达获得重组蛋白,并初步验证其在1型糖尿病蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体检测中的价值。方法:用RT-PCR方法调取目的基因,构建相应的原核表达质粒,转化大肠杆菌HB101,诱导表达获得纯化重组蛋白;以重组蛋白为包被抗原,初步建立检测蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体的ELISA方法,评价各片段在1型糖尿病诊断中的价值。结果:获得了2种可被1型糖尿病患者血清识别的重组人蛋白酪氨酸磷酸酶抗原区段IA-2(601～979)和IA-2(683～979),检测敏感性和特异性相当,但IA-2(683～979)检测的阳性D450nm值明显高于IA-2(601～979),成为首选的抗原区段。结论:所选重组人IA-2(683～979)抗原区段具有良好的抗原性,可作为1型糖尿病患者辅助诊断试剂的候选抗原。