兰科植物黄花白及Bletilla ochracea内生真菌多样性分析

黄花白及Bletilla ochracea是一种地生兰科植物,也是中国传统中药材之一。以黄花白及为实验材料,对其叶和根组织中内生真菌类群组成及多样性进行分析。结果表明,从黄花白及植株的叶片和根组织块(段)中分离到可培养内生真菌140株,根据形态特征将它们鉴定为16个分类单元,其中包括10种子囊菌和6种担子菌。从叶片组织中分离的内生真菌有6种,其中刺盘孢属Colletotrichum真菌为叶片组织中的优势种类;从根组织中分离内生真菌有10种,瘤菌根菌属Epulorhiza和腊壳菌属Sebacina真菌构成了根组织内生真菌的优势类群。根组织可培养内生真菌的多样性(H′=1.968)要高于叶片组织(H′=1.459)。     

多炔化合物氧化胁迫下稗草细胞保护酶系的反应

用多炔类化合物1-苯基-4-(3,4-亚甲二氧)-苯基丁二炔(简称化合物5)处理稗草(Echinochloa crusgalli)愈伤组织,经紫外光(320～400nm)照射后,诱导细胞内形成氧化胁迫环境。利用生化酶学方法,测定几种保护酶系在氧化环境下的活性变化。发现经化合物5和照光处理后,可诱导激活细胞内的谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化物酶(POD)的活性,而超氧化歧化酶(SOD)则表现为活性受抑制。以0．1～10mg／L的浓度处理,所测GST、GSH-Px和POD的照光诱导活性明显高于未经照光处理的活性。其中以10mg／L,的浓度处理,照光所提高3种酶活性的百分率分别为10．47％、113．68％和166．68％。以1mg／L和10mg／L的浓度处理,照光对SOD的抑制百分率分别为50．25％和76．46％。测定结果表明：在外源光敏物质引起细胞内的氧化胁迫环境下,可激活细胞内保护酶的活性,用于抵御氧化逆境对细胞的损伤。而SOD则可能是化合物5光活化抑制稗草生长的生化作用靶标酶之一。     

高致病性PRRSVNsp2基因RNA干扰对病毒复制的影响

旨在构建针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJ株Nsp2基因的siRNA的表达载体,研究Nsp2基因的表达抑制对PRRSV复制的影响。设计并合成针对PRRSV TJ株Nsp2基因的3对优势小发卡RNA(shRNA),连接到pRNAT-U6.1/Neo,构建shRNA表达载体,将鉴定正确的载体质粒转染Marc-145细胞,6 h后接毒,每日观察CPE;在接毒PRRSV TJ株后不同时间点取上清样品,测定样品TCID50;并以β-actin为内参,RT-PCR对PRRSV Nsp2 mRNA进行半定量。结果表明,选取的3条Nsp2基因的优势siRNA均能够抑制PRRSV TJ株在Marc-145细胞上增殖,其中shRNA载体S-1和S-2抑制效果明显,与空载体相比较差异极显著。本研究构建的PRRSV Nsp2基因特异性shRNA载体能够有效抑制PRRSV的复制,可使病毒滴度TCID50最多降低103.38。     

光活化多炔类化合物对蚊幼虫的毒力

采用自制的光活化实验装置,测定了11个合成的多炔类化合物对致倦库蚊Culex quinquefasciatus 4龄幼虫的光活化毒力,发现部分化合物在近紫外光照射条件下,能明显地提高光活化毒杀效应,测得化合物5(1-苯基-4-(3,4-亚甲基二氧)苯基-丁二炔)光照与未光照处理LC₅₀分别是0.35 μg/mL和8.89 μg/mL。实验中发现蚊虫先接触药后,再进行光照处理,才能较好地发挥毒效,而且毒杀效应与光照时间呈正相关。模拟田间试验表明,太阳光能显著提高化合物5毒杀蚊幼虫的药效。利用抗氧化剂进行猝灭作用试验,间接地证明化合物5的光活毒杀机理是与过氧化作用有关。分析结构与活性关系,发现二苯基-丁二炔衍生物比二烷基取代丁二炔活性高,苯基上不同取代基也影响光活毒杀效果,它们的活性顺序是：亚甲基二氧基>甲氧基>邻硝基>间硝基>甲基酯。     

多炔类化合物对亚洲玉米螟产卵驱避作用及玉米螟的触角电位反应

以茵陈二炔为结构母体,人工合成了11个多炔类化合物。采用蜡纸接卵法,测定了11 个化合物对亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis的产卵驱避活性。结果表明: 当处理浓度为20 μg/cm²时,受试的化合物对亚洲玉米螟的产卵行为具有一定程度的驱避作用,其中化合物9（1-苯基-4-甲基-丁二炔）对亚洲玉米螟产卵驱避作用明显, 调查处理后的3天、4天、 5天和6天,其产卵驱避率分别为85.71%、80.00%、61.27%和62.51%。触角电位测定表明,受试的11个化合物对亚洲玉米螟成虫触角感受器具有刺激作用,其中化合物6和化合物9能强烈地刺激产生高振幅的动作电位。10 mg/mＬ浓度处理,测得化合物6触角电位相对值, 雌、雄虫分别为68.22% 和106.60%,化合物9分别为199.19% 和220.60%。经回归分析所测11个化合物的产卵驱避活性与触角电位反应相对值,两者呈现一定程度上的相关性。还讨论了合成的多炔类化合物对亚洲玉米螟可能的作用靶标和结构与活性间的关系。     

多炔类化合物对美洲大蠊的触杀活性及对乙酰胆碱酯酶和腺苷三磷酸酶活性的影响

采用药膜法测定了人工合成的11个多炔类化合物对美洲大蠊Periplaneta americana初孵若虫的触杀活性。结果表明,当化合物处理浓度为20 μg/cm²时,致死率达70%以上的有: 化合物2 (1-叔丁基-4-羟甲基-丁二炔)、化合物9 (1-苯甲基-4-甲基-丁二炔)和化合物10 (O-炔丙基硫代磷酸二乙酯)。经毒力测定,化合物9和化合物10的LC₅₀分别为3.91 μg/cm²和1.50 μg/cm²。化合物2、化合物7 (1-苯基-4-邻硝基苯基-丁二炔)和化合物10对美洲大蠊乙酰胆碱酯酶(AChE)具有抑制活性,抑制率分别为12.00%、27.24%和62.22%。化合物2和化合物10对Na⁺-K⁺-ATPase具有抑制活性,抑制率分别为44.55%和31.44%;而化合物5 (1-苯基-4-（3,4-亚甲基二氧）苯基-丁二炔)和化合物6 (1-苯基-4-间硝基苯基-丁二炔)对该酶具有激活活性,激活率分别为24.98%和20.99%。化合物2、化合物4 （1-苯基-4-对甲氧基苯基-丁二炔）和化合物7对Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase具有抑制活性,抑制率分别为49.02%、38.53%和35.32%, 其他化合物对该酶具有激活活性,其中激活活性最高的为化合物5,激活率达81.12%。     

骆驼蓬中活性物质的研究

骆驼蓬的水提取液对油菜种子的萌发、幼苗根和下胚轴的伸长具有明显的抑制活性。以油菜幼苗根的伸长率为活性指标,跟踪鉴定骆驼蓬种子的乙醇提取物及各步分离样品的生物活性。发现在硅胶薄层活性谱上R_f值0.4～0.5的成分活性最强。鉴定其结构为骆驼蓬碱。骆驼蓬碱除对小麦芽鞘切段伸长和绿豆下胚轴生根具有强烈的抑制作用外,还有一定的促进作用。