富勒烯衍生物C60-叶酸对胃癌细胞生长抑制作用的研究

目的研究光照后的富勒烯衍生物C60-叶酸对体外培养的人类胃癌细胞杀伤及其促进胃癌细胞凋亡的作用。方法将光照后不同浓度C60-叶酸与人类胃癌细胞混合培养,用MTT方法检测不同条件下培养的人类胃癌细胞存活率。培养细胞免疫组化检测凋亡细胞中Caspase 3表达。Western blot比较各组中抗凋亡蛋白质Akt1的表达水平。结果随着光照后C60-叶酸浓度增加,人类胃癌细胞的存活率降低,同时凋亡细胞数量增多,且Akt1表达下调。结论 C60-叶酸光照后对人类胃癌细胞有较强的杀伤作用,作用机制与细胞凋亡有关。     

原核表达的萝卜PHGPx对黑色素瘤B16细胞紫外辐射损伤的恢复作用

将大肠杆菌中高效表达的萝卜PHGPx（RsPHGPx）和突变的RsPHGPx（mRsPHGPx）融合蛋白,经Glutathione Sepharose 4B柱亲和纯化和PreScission蛋白酶柱上酶切,获得了不含GST标签的RsPHGPx和mRsPHGPx重组蛋白,纯度在90%以上。酶活测定验证了活性中心Cys突变的mRsPHGPx的活性显著低于RsPHGPx。考察RsPHGPx和mRsPHGPx对紫外辐射损伤后的黑色素瘤B16细胞的恢复作用,发现活性较高的RsPHGPx能有效提高细胞存活率,降低细胞膜脂质过氧化水平,而活性极低的mRsPHGPx则几乎没有效果,提示由于RsPHGPx能快速清除多种脂类过氧化物,可能主要通过抑制紫外辐射造成的细胞膜脂质过氧化损伤起作用。     

原核表达的萝卜PHGPx和谷胱甘肽对NIH3T3细胞氧化损伤的联合保护作用

将大肠杆菌中高效表达的萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(RsPHGPx)及其底物还原型谷胱甘肽(GSH)联合作用于H2O2、过氧化叔丁基(t-BHP)以及磷脂氢过氧化物(PLPCOOH)损伤的小鼠NIH3T3成纤维细胞,研究其对于细胞过氧化损伤的保护作用。发现单独加入10 μg/ml RsPHGPx并不能明显保护细胞应对过氧化损伤,但是10 μg/ml RsPHGPx与3 mg/ml GSH共同作用,可显著提高GSH对细胞过氧化损伤的保护效果,提高细胞存活率,降低细胞膜脂质过氧化水平和胞内活性氧(ROS)水平,保护细胞维持形态完整和抑制细胞凋亡。这一联合作用结果说明RsPHGPx的催化作用可以快速清除细胞内多种过氧化物,高效地保护细胞免受过氧化损伤,为RsPHGPx的应用提供了实验依据。