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1.
采用酵母表面展示系统,表达带3蛋白膜段结构域(Gln404~Val911)至酵母细胞膜,功能研究表明,表达后的膜段结构域具有离子转运的活性,同时,带3蛋白抑制剂4,4′-二异硫氰-2,2′-二黄酸芪(DIDS)能够抑制其离子转运的功能.利用PCR方法,以pFAST-Bac-mdb3为模板扩增出带3蛋白膜段结构域的4种截断突变体,分别去除带3蛋白C端域后4个(Ala908~Val911)、16个(Asp896~Val911)、20个(Lys892~Val911)、32个(Asn880~Val911)氨基酸序列,测序后将其克隆至表达载体pYD1上,构建酵母表达质粒pYD1-Trunc4、pYD1-Trunc16、pYD1-Trunc20和pYD1-Trunc32,诱导4组突变体的蛋白质表达.然后测定Cl-的转运活性,结果发现去除后20个(Lys892~Val911)氨基酸残基后,离子转运活性明显下降,而去除后32个(Asn880~Val911)后,离子转运没有进一步下降,说明Lys892~Phe895 4个氨基酸残基在带3蛋白的离子转运过程中发挥重要作用.  相似文献   
2.
带3蛋白C端和血型糖蛋白A相互作用及其抗原相关性的研究   总被引:7,自引:2,他引:5  
采用高效液相色谱法分离鉴定了红细胞膜蛋白质跨膜域的亲水性肽链,结果显示血型糖蛋白A(GPA)Lys101~Asp130与带3蛋白有相关性.为进行深入研究,采用RT-PCR方法从K562细胞中扩增了410 bp的GPA基因,分别克隆到酵母双杂交BD端表达质粒和杆状病毒转移载体上.同时,以含有带3蛋白全长基因的质粒为模板扩增了348 bp的带3蛋白C端基因,将其克隆到酵母双杂交AD端表达质粒.经酵母双杂交营养缺陷培养选择和β半乳糖苷酶检测证实GPA与带3蛋白之间存在相互作用.GPA表达产物分别经抗带3蛋白和抗GPA抗体进行蛋白质印迹分析,表明二者具有免疫交叉反应.上述结果表明带3蛋白与GPA在结构与功能上存在着密切联系.  相似文献   
3.
目的:测定胃癌AGS细胞内pH(intracellular pH,pHi),探讨细胞外酸性环境对AGS细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用离子成像分析系统测定AGS细胞的pHi,MTT及流式细胞术分别检测培养环境pH值为6.0时AGS细胞的活力、细胞周期和凋亡。结果:AGS细胞内pH明显碱化,在pH值为6.0的酸性环境培养时,细胞活力在12小时内明显抑制,细胞停滞在S和G2/M期,细胞凋亡不明显。结论:胃癌细胞AGS明显碱化,pH值为6.0的酸性环境使细胞数量减少和活力下降,其机制是使细胞出现增殖抑制而与凋亡无关。  相似文献   
4.
采用酵母表面展示系统 ,表达带 3蛋白膜段结构域 (Gln4 0 4~Val911)至酵母细胞膜 ,功能研究表明 ,表达后的膜段结构域具有离子转运的活性 ,同时 ,带 3蛋白抑制剂 4 ,4′ 二异硫氰 2 ,2′ 二黄酸芪 (DIDS)能够抑制其离子转运的功能 .利用PCR方法 ,以 pFAST Bac mdb3为模板扩增出带 3蛋白膜段结构域的 4种截断突变体 ,分别去除带 3蛋白C端域后 4个 (Ala90 8~Val911)、 16个 (Asp896~Val911)、 2 0个 (Lys892~Val911)、 32个(Asn880~Val911)氨基酸序列 ,测序后将其克隆至表达载体 pYD1上 ,构建酵母表达质粒 pYD1 Trunc4、pYD1 Trunc16、pYD1 Trunc2 0和 pYD1 Trunc32 ,诱导 4组突变体的蛋白质表达 .然后测定Cl-的转运活性 ,结果发现去除后 2 0个 (Lys892~Val911)氨基酸残基后 ,离子转运活性明显下降 ,而去除后 32个 (Asn880~Val911)后 ,离子转运没有进一步下降 ,说明Lys892~Phe895 4个氨基酸残基在带 3蛋白的离子转运过程中发挥重要作用  相似文献   
5.
赵伟  傅国辉 《生命科学》2007,19(6):607-613
阴离子交换蛋白(anion exchanger,AE)家族由AE1、AE2和AE3三个成员组成,介导哺乳动物细胞普遍存在的C1一/HCO,跨膜交换过程,进而调节细胞内pH值(intracellular pH,pHi)和细胞体积。在极化的上皮细胞,Cl^-/HCO3^-的跨膜交换也是经上皮的酸碱分泌和重吸收的重要调节因子。AE1丰富地表达在红细胞,其N末端截短形式也表达在肾脏;AE2广泛地表达在各种组织,但以胃最为丰富;AE3表达在脑、视网膜和心脏。近年来对AE家族结构与功能的研究取得的新进展揭示了AE家族在某些病理过程中发挥重要作用。本文就AE家族的结构与功能及其病理作用进行了讨论。  相似文献   
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