绍鸭卵巢卵泡发育相关新EST的分离与表达

采用银染mRNA差异显示方法从绍鸭卵巢等级卵泡中分离并筛选到 3个差异表达序列标签 (ExpressedSequenceTags ,ESTs)SXDF0 2 0 1(2 71bp)、SXDF0 2 0 2 (2 0 0bp)和SXDF0 2 0 3(173bp) ,通过测序和BLAST检索 ,发现SXDF0 2 0 1与GenBank中登录的所有物种的所有序列均无同源性 ,是在绍鸭卵巢卵泡发现的新EST ,现已登录GenBank(GenBank登录号 :CB0 72 6 2 9) ,而SXDF0 2 0 2和SXDF0 2 0 3则分别与GenBank公布的鸡的EST和肌胃肌球蛋白重链高度同源。用 5′ RACE将SXDF0 2 0 1延伸至 5 4 4bp ,经过BLAST再次检索 ,仍然未发现中度同源序列采用相对定量RT PCR方法进一步研究SXDF0 2 0 1和SXDF0 2 0 2在绍鸭组织中的时空特异性表达 ,发现这两个EST在产蛋高峰期绍兴鸭的下丘脑、垂体、肌肉、肝脏、脂肪等组织都有表达 ;SXDF0 2 0 1在 30日龄卵巢的表达水平显著高于 6 0 (P <0 0 5 )和 90 (P =0 0 15 )日龄 ;而SXDF0 2 0 2在卵巢发育的不同阶段的表达水平没有变化 ;SXDF0 2 0 1在卵巢卵泡颗粒层中的表达总体高于膜层 ,SXDF0 2 0 2在颗粒层中的表达F3 >F5>Fw(P <0 0 1) ,而在F1卵泡降至最低 (P <0 0 1) ,膜层中以Fw 卵泡表达水平最高 (P <0 0 1)。     

Effect of recombinant growth hormone on expression of growth hormone receptor, insulin-like growth factor mRNA and serum level of leptin in growing pigs

Growth hormone (GH) plays an important role in regulation of animal growth, metabolism and lactation[1]. Numerous studies have shown that exogenous somatotropin (ST) can increase average daily weight gain, improve feed efficiency, stimulate protein deposition and muscle growth and decrease lipid accretion rate[1]. The original somatomedin hypothesis suggested that the effect of GH on postnatal growth was mediated by insulin-like growth hormone factor 1 (IGF-I) which was thought to be deriv…     

Effect of recombinant growth hormone on expression of growth hormone receptor,insulin-like growth factor mRNA and serum level of leptin in growing pigs

Sixteen Large White × Landrace castrated male pigs were allotted into treatment and control group. The treatment group was injected intramuscularly with recombinant porcine growth hormone (rpGH, 4 mg d⁻¹) and the control group with vehicle for 28 days. Animals were slaughtered 4 h after final injection for liver, longissimus dorsi (LD) muscle and blood sampling. Serum concentration of insulin-like growth factor 1 (IGF-I) and leptin were determined by RIA. The total RNA was extracted from tissues to measure the abundance of growth hormone receptor (GHR), IGF-I mRNA by RT-PCR with 18S rRNA internal standard. Results showed that rpGH enhanced the average daily weight gain by 26.1% (P < 0.05), the serum IGF-I concentration by 70.94% (P < 0.01), decreased serum leptin by 34.8% (P < 0.01). The relative abundance of GHR and IGF-I mRNA in liver were increased by 24.45% (P < 0.05) and 45.30% (P < 0.01), respectively, but no difference of GHR (P > 0.05) and IGF-I mRNA (P > 0.05) in LD between GH treated and control group was found. These results suggest that rpGH can up-regulate hepatic GHR and IGF-I gene expression and improve animal growth. However the effect of rpGH on GHR and IGF-I gene expression are tissue-specific.     

重组生长激素对猪生长激素受体和胰岛素样生长因子1基因表达及血清瘦蛋白水平的影响

16头长白×大约克去势公猪, 随机分成试验组和对照组, 每天注射重组猪生长激素(rpGH, 每头每天4 mg) 或生理盐水, 28 d后采样. 用RIA法测定血清中胰岛素样生长因子1(IGF-Ⅰ)和瘦蛋白含量, 用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法, 以18S rRNA作内标, 定量分析肝脏、肌肉生长激素受体 (GHR) 和IGF-ⅠmRNA的相对丰度.结果显示: (ⅰ) 试验组平均日增重提高26.1% ( P <0.05); (ⅱ)血清IGF-Ⅰ水平提高70.94% (P<0.01), 血清瘦蛋白降低34.80%(P<0.01); (ⅲ) 肝脏GHR mRNA增加24.45% (P < 0.05), IGF-ⅠmRNA增加45.30% (P<0.01), 背最长肌GHR和IGF-Ⅰ mRNA表达无明显变化. 结果表明, 重组猪生长激素能明显提高生长猪生长性能. 上调肝脏GHR, 促进肝脏产生IGF-Ⅰ, 而对肌肉GHR和IGF-I基因表达无影响, 提示重组GH对基因表达的影响有组织特异性.     

GH受体、IGF-I型受体、FSH受体和LH受体mRNA在绍鸭各级卵泡颗粒层和膜层中的表达

采用相对定量反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法,以β-actin为内标,测定绍鸭排卵前卵泡F1、F3、F5及大白卵泡(LWF)颗粒层与膜层中GH受体(GHR)、IGF-I型受体(IGF-IR)和FSH受体(FSHR)、LH受体(LHR)mRNA表达水平,以分析生长轴和生殖轴激素对绍鸭卵泡发育的协同调节作用。结果表明：在所测定的各级卵泡中,GHR mRNA在膜层的表达水平均显著高于颗粒层,膜层中大白卵泡表达量最高,而颗粒层中GHR mRNA水平在各级卵泡之间没有明显差异;相反,IGF-IR mRNA在同级卵泡颗粒层的表达水平显著高于膜层,颗粒层和膜层中IGF-IR mRNA表达在各级卵泡之间的差异均不显著,只是大白卵泡的膜层与其他等级卵泡的膜层相比,IGF-IR的表达量呈现较高的趋势;FSHR mRNA表达的变化趋势类似于IGE-IR,同级卵泡颗粒层中的表达量高于膜层;LMR mRNA在各级卵泡膜层中表达没有明显差异,而颗粒层中IMR mRNA随着卵泡发育成熟逐级显著增加,且F5和LWF卵泡膜层的IMR mRNA显著高于颗粒层,与GHR mRNA的表达相似。结果提示,GH和IGF-I调节卵巢功能的优势作用位点和机制不尽相同;GHR和LHR协同表达与IGF-IR和FSHR协同表达可能对卵泡发育起到精细的调节作用;而IMR在卵泡颗粒层中表达的逐级显著增加可能与卵泡等级的建立和排卵有关。     

长短日照下绍鸭性成熟时间,下丘脑GnRH-I、POMC和NPY mRNA表达的差异

利用长日照和短日照环境调控绍鸭的性成熟时间,并采用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法, 检测两种日照组(n=6)鸭性成熟过程中下丘脑促性腺激素释放激素-Ⅰ(GnRH-Ⅰ)、阿片促黑激素皮质素 原(POMC)和神经肽Y(NPY)mRNA表达的发育性变化及日龄间差异。结果表明,长日照组性成熟时间较短 日照组提前30d。RT-PCR结果显示,两组鸭下丘脑GnRH-Ⅰ mRNA的发育性表达模式相似,从出雏至性成熟 过程中,其表达水平呈逐渐增加趋势;长日照组下丘脑GnRH-Ⅰ mRNA表达丰度均高于同日龄短日照组,并于 120日龄时其差异达显著水平。两组POMC mRNA的表达丰度呈现先增加后降低趋势,于性成熟前后显著下降; 日照长度对其基因表达具有显著影响。两组NPY mRNA表达水平分别于60和90日龄时显著升高,于性成熟时 显著下降,但光照对其基因表达无显著影响。下丘脑GnRH-Ⅰ基因表达的显著上调可能是禽类性成熟启动的关 键因素,也是长日照条件下绍鸭性早熟的主要原因;GnRH-Ⅰ表达的上调与下丘脑POMC和NPY mRNA表达变 化有关。     

早期和后期限饲对肉鸡腓肠肌肌纤维类型和生长轴相关基因表达的影响

1日龄三黄雏鸡随机分为自由采食对照组(C)、1-14日龄隔日饲喂的早期限饲组(ER)和50-63日龄隔日饲喂的后期限饲组(LR)。63日龄采腓肠肌外侧头,ATPase染色法及相对定量RT-PCR法检测不同类型肌纤维含量及生长轴相关基因(GHR、IGF-I、IGF-IR)表达。结果表明:E组慢肌纤维含量降低,快肌纤维含量增加,L组无变化。E组慢肌肌球蛋白重链基因表达低于对照组(P<0·05),并伴随生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-ⅠR)mRNA表达的上调(P<0·05),L组无显著变化。提示:早期限饲可对肉鸡生长和肌纤维类型产生长期而且显著的影响,并且涉及肌肉中生长相关基因表达的改变,而后期限饲对肉鸡影响较小,说明早期和后期限饲通过截然不同的机制影响肉鸡肌肉生长。     

半胱胺对断奶前后仔猪血清皮质醇、T3、T4和IL-2水平的影响

选取新生仔猪18窝,随机分为对照组和处理组各9窝。从12日龄开始,对照组饲喂基础乳猪料;处理组在基础乳猪料中添加半胱胺,剂量为120mg／kg饲料。两组仔猪均在35日龄断奶。分别于断奶前7d(28日龄,D28),断奶当天(D35),断奶后36h(D36．5)、72h(D38)、7d(D42)、10d(D45),随机选取对照组和处理组仔猪各6头,屠宰采集血样。采用放射免疫分析法测定仔猪血清皮质醇、三碘甲腺厚氨酸(T3)、甲状腺激素(T4)和白细胞介素-2(IL-2)水平。结果表明：(1)对照组血清皮质醇水平在断奶前保持稳定,在D36．5时升高,在D42时恢复至D35水平,随后保持稳定;处理组血清皮质醇水平在D36．5时较D35有升高趋势,在D38时恢复至D35水平,随后保持稳定。对照组血清T3水平在D36．5显著高于D28,其他日龄点间无显著差异,处理组基本保持稳定。对照组血清T4水平在D36．5时升高,在D38日时恢复至D35水平,随后保持稳定;处理组血清T4水平从D35至D45基本保持稳定。两组中血清IL-2水平在D28至D42保持稳定,D45升高。(2)在D36．5时,处理组血清皮质醇水平较对照组降低30％,处理组血清T3水平在D35和D45较对照组提高49．2％和38．6％,T4水平在D35和D45提高31％和45．8％,在其他日龄点,处理组T3、T4水平较对照组有升高趋势,但差异不显著。处理组IL-2水平在D36．5、D38、D45也分别较对照组提高22．1％、12．6％和17．8％,在其他日龄点有升高趋势。以上结果提示半胱胺能抵抗仔猪断奶应激,提高仔猪血清T3、T4水平,增强仔猪的免疫力。     

长短日照下绍鸭性成熟时间,下丘脑GnRH-Ⅰ、POMC和NPY mRNA表达的差异

利用长日照和短日照环境调控绍鸭的性成熟时间,并采用反转录多聚酶链式反应（RT．PCR）方法,检测两种日照组（n=6）鸭性成熟过程中下丘脑促性腺激素释放激素-Ⅰ（GnRH-Ⅰ）、阿片促黑激素皮质素原（POMC）和神经肽Y（NPY） mRNA表达的发育性变化及日龄间差异。结果表明,长日照组性成熟时间较短日照组提前30d。RT-PCR结果显示,两组鸭下丘脑GnRH-Ⅰ mRNA的发育性表达模式相似,从出雏至性成熟过程中,其表达水平呈逐渐增加趋势;长日照组下丘脑GnRH．ImRNA表达丰度均高于同日龄短日照组,并于120日龄时其差异达显著水平。两组POMC mRNA的表达丰度呈现先增加后降低趋势,于性成熟前后显著下降;日照长度对其基因表达具有显著影响。两组NPYmRNA表达水平分别于60和90日龄时显著升高,于性成熟时显著下降,但光照对其基因表达无显著影响。下丘脑GnRH-Ⅰ基因表达的显著上调可能是禽类性成熟启动的关键因素,也是长日照条件下绍鸭性早熟的主要原因;GnRH-Ⅰ表达的上调与下丘脑POMC和NPY mRNA表达变化有关。