人羊膜间充质细胞分离培养及其干细胞特性研究

目的：研究人羊膜间充质细胞（Humanamnioticmesenchymalcells,HAMCs）的分离、培养及其干细胞特性,为羊膜间充质细胞在再生医学的潜在应用奠定实验基础。方法：无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片,经胰酶胶原酶序贯消化,DMEM/F12培养,倒置显微镜下观察其形态,MTT法检测其生长规律,免疫荧光的方法对细胞进行鉴定,定向诱导方法检测细胞的多向分化潜能。结果：来源于羊膜的间充质细胞,细胞免疫荧光显示SSEA-4,OCT-4阳性,具有很强的增殖能力,并且具有一定的多向分化能力,在特定条件下可分化为脂肪细胞和成骨细胞;结论：羊膜间充质细胞能够在体外分离、培养、扩增,并且具有干细胞特性。羊膜间充质细胞在再生医学和组织工程应用有很好的前景。     

骨形成蛋白Ⅱ型突变受体基因转染对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨骨形成蛋白（BMPs）与口腔鳞癌的发生、发展的可能关系。方法将含有BMP-Ⅱ突变受体的真核表达载体转染入Tea8113舌癌细胞,筛选和鉴定后,构建稳定表达BMP-Ⅱ突变受体的细胞株tBRⅡ-Tea8113。对tBRⅡ—Tca8113细胞和Tca8113细胞分别进行MTT检测,流式细胞仪（FCM）分析、BrdU标记检测细胞的增殖活性及DNA合成;检测tBRⅡ-Tca8113细胞和Tea8113细胞的凋亡及细胞周期相关因子（CyclinD1,CDK-4,p27,p57）的表达。结果Tea8113细胞和tBRⅡ-Tea8113细胞的增殖指数MTT检测为0．47±0．01和0．35±0．008（t=22．953,P=0．000）,BrdU检测为12．0±3．4和23．0±1．9（f=6．918,P=0．000）,FCM检测为6.3和7．9;两组的凋亡指数为3．7±1．2和8．7±1．6（t=29．583,P=0．000）;细胞周期因子在Tca8113和tBRⅡ-ca8113细胞中的平均灰度测量值为CyclinD1（186．5±2．4和145．6±3．9,t=28．244,P=0．000）,CDK4（169．9±2．9和129．5±3．2,t=29．583,P=0．000）,p27（110．1±1．1和167．34-1．8,f=85．754,P=0．000）,p57（107．9±2．1和156．8±2．2,t=50．844,P=0．000）。结论BMPs及其受体可能在口腔上皮组织的恶变过程中有重要作用,研究结果为探讨BMPs信号在上皮性肿瘤中的作用提供了重要依据。tBRⅡ-Tea8113细胞的建立,进一步表明了BMPs及其受体在口腔上皮组织的恶变过程中有重要作用,并为进一步探讨BMP信号在上皮性肿瘤的恶变过程中的作用奠定了基础。     

美能联合冰石愈伤治疗带状疱疹的疗效观察

目的:评价美能联合冰石愈伤治疗带状疱疹的疗效.方法:将156例带状疱疹患者随机务为2组,每组78例.治疗组美能50mg口服.3次/d,冰石愈伤外敷,3次/d,连用10 d;对照组用氧化锌油外涂,2次/d;其它基础治疗两组相同.结果:治疗组症状、体征消退时间明显短于对照组(P＜0.05),后遗神经痛发病率治疗组明显低于对照组.结论:美能联合冰石愈伤治疗带状疱疹的疗效优于对照组.     

异体组织工程牙胚移植的免疫反应研究

目的:探索异体组织工程牙胚移植的免疫反应,明确诱导免疫抑制药物他克莫司对免疫相关因子的影响.方法:采用出生后猪第一磨牙牙胚与煅烧骨复合构建组织工程牙胚植入异体猪肠系膜,移植后应用他克莫司作为免疫抑制剂,特定时间点取材,HE染色观察移植牙胚的发育及免疫反应,免疫组织化学及图像分析了解免疫相关因子CD4/8的表达变化.结果:肠系膜移植后移植物内可见大量浸润的淋巴细胞,应用他克莫司后,CD4+T细胞的分泌明显下降,组织工程牙胚可在大网膜内进一步发育形成牙髓-牙本质复合体.结论:他克莫司可有效地避免因牙胚异体移植导致的免疫反应,本试验为以后组织工程牙胚的临床应用提供了实验基础.     

定喘汤雾化吸入对DPB的呼吸道微生态影响及改善呼吸困难的实验研究

应用中药方剂定喘汤通过雾化吸入法研究对DPB的呼吸道微生态影响及改善呼吸困难的实验研究,并与口服红霉素进行对比观察。结果证明：定喘汤可改善因绿脓杆菌而导致细支气管的慢性炎症关能缓解DPG所出现的呼吸。实验结果提示：定喘汤可改善DPS临床症状并能调整呼吸道微生态失调,有应用临床治疗DPS的价值。     

注射性组织工程牙胚的构建及成牙能力研究

目的:探索采用大鼠牙胚细胞构建可注射组织工程牙齿的可行性及在体内肾被膜移植的成牙能力研究。方法:采用出生后4d SD仔鼠磨牙牙胚细胞,培养传代后将牙胚细胞与牛真皮基质蛋白溶液混合构建组织工程牙胚,利用注射器植入SD大鼠肾被膜下,2wk后取材,HE染色观察移植物中的组织成熟情况,Masson’s三色法观察组织工程牙胚的成牙能力。结果:组织工程牙胚移植后2wk可在肾被膜下形成乳白色矿化组织,HE染色上皮细胞和间充质细胞进行重组,形成典型的牙髓牙本质复合体样组织和釉质样结构,Masson’s三色法可见绿色矿化基质形成并包绕牙乳头样组织。结论:牙胚细胞仍保留了牙齿发育的位置信息,采用牛真皮基质蛋白溶液作为组织工程支架有助于牙胚细胞相互作用并重新排列,构建的组织工程牙胚具有进一步成熟、矿化并形成牙齿的潜能。     

H－ras在颊粘膜正常、良性、癌前及恶性变上皮中的表达：免疫组织化学定量研究

本文通过建立图象分析方法对免疫组织化学反应结果进行定量,检测观察Ｈ－ｒａｓ在口腔颊粘膜上皮在正常（Ｎ）、慢性炎症（ＩＦ）、癌旁上皮（ＥＡＣ）和鳞癌（ＳＣＣ）的变化过程中的表达并进行分析。结果显示Ｈ－ｒａｓ在ＳＣＣ组中,以中等分化的ＳＣＣ无论是Ｈ－ｒａｓ表达的量还是细胞阳性率都较高。此外,组织学观察显示,Ｈ－ｒａｓ在处于分化末期但尚未角化的正常上皮细胞中有较高的表达。本文结果显示了Ｈ－ｒａｓ的过表达与上皮细胞的会化程度密切相关。本研究还显示,所采用的阳性区域透光值、平均总透光值及阳性反应区域与阴性反应区域比值可靠并有相关性。这进一步说明了用免疫组化定量方法检测Ｈ－ｒａｓ癌基因表达的精确和可靠性。     

化学腐蚀性组织工程皮肤检测模型的构建

利用组织工程学方法,以牛I型胶原为支架,人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞为细胞来源,构建化学腐蚀性检测用组织工程皮肤模型。选用欧洲替代方法验证中心(the Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods,ICCVAM)制定的体外测试化学品腐蚀性最小执行标准中的8种化学品为检测物质。在检测实验中,8种化学品(固体10mg、液体25μl)分3min、1h局部接触组织工程皮肤模型表面,MTT方法测定细胞活力,相对细胞活力值作为判定腐蚀性的标准。结果表明,构建的组织工程皮肤检测模型结构完整,含有基底层、棘层、颗粒层和角质层,能准确判断7种化学品的腐蚀性。构建的组织工程皮肤模型可以作为检测工具用于化学品腐蚀性的检测。     

人的原代上皮角质形成细胞和永生化的上皮角质形成细胞HaCaT 的增 殖能力的比较*

目的:筛选适合充当组织工程皮肤的种子细胞,比较原代培养的人原代上皮角质形成细胞和永生化的上皮角质形成细胞HaCaT的增值能力。方法:将两种细胞(小儿包皮环切术后的组织培养表皮角质形成细胞,永生化的上皮角质形成细胞HaCaT),分别接种于96孔板,通过MTT检测细胞1,3,5,7,9,11天的生长情况;当两种细胞融合至60%时分别取1×106个细胞,通过流式细胞检测细胞的周期。结果:永生化的上皮角质形成细胞HaCaT每隔一天即可传代一次,原代上皮角质形成细胞每3天传代一次;细胞周期:永生化上皮角质形成细胞HaCaT的G1期和S期的比例高于原代上皮角质形成细胞。生长曲线:MTT检测两种细胞1,3,5,7,9,11的生长情况,永生化的上皮角质形成细胞HaCaT的生长速度明显高于原代上皮角质形成细胞。结论:永生化上皮角质形成细胞HaCaT的增殖能力要高于原代培养的上皮角质形成细胞。     

制备复合生长因子的缓释微球并考察其对细胞的影响

目的:制备复合碱性成纤维细胞生长因子的可降解缓释微球,考察其生物活性保存情况,以及其对上皮细胞的作用。方法:采用改良的乳化冷凝法交联制备明胶缓释微球,将其加入上皮细胞的培养液中,用细胞计数法、四甲基偶氮唑盐微量反应比色法(MTT法)测定细胞增殖情况。结果:缓释微球平均粒径12.36±3.56μm;培养1 d后各组细胞计数、吸光度(D)值差异均无显著性意义;5d后,缓释微球组细胞计数、吸光度(D)值明显高于对照组;7 d后,缓释微球组值仍高于其它组,但差异无显著性意义。结论:复合生长因子的缓释微球制备工艺简便,成球性好;能较长时间持续释放活性生长因子,明显促进细胞增殖。