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1964年 | 1篇 |
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1.
采用冻干浓缩、(NH4)2S04盐析、HiTrapphenyl(FF)疏水层析和QSepharose FastFlow离子交换层析对灵芝EIM-40发酵液进行分离纯化,获得纯化漆酶,纯化倍数为14.6,回收率为5.3%。SDS-PAGE银染的结果为单一条带,相对分子质量约为6.53×104。以愈创木酚和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为催化底物进行酶学性质研究,最适pH分别为4.8和4.5,最适温度分别为55和50℃,2种底物在pH4.0。5.0范围内,温度低于50℃时,酶的稳定性都很好。以愈创木酚为底物,Km=645.0umol/L;以ABTS为底物,Km=22.2txmol/L。Cu2+对该酶起激活作用,Fe2+、Ca2+、Ba2+则完全抑制酶的活性。 相似文献
2.
人DNA 拓扑异构酶Ⅰ在毕赤酵母中的表达及发酵条件优化 总被引:1,自引:0,他引:1
为了在体外以人DNA拓扑异构酶Ⅰ(hTopoⅠ)为靶位进行抗肿瘤化合物的快速筛选,用RT-PCR法从Hela细胞中克隆了hTopoⅠ基因ORF并在毕赤酵母中首次成功表达,表达产物可分泌到发酵上清,易于制备。蛋白酶A缺陷的重组酵母(SMD-hTopoⅠ)分泌重组酶的能力比具有蛋白酶A活性的重组酵母(X33-hTopoⅠ和KM-hTopoⅠ)更高。通过发酵条件的优化,使用BMMY(pH7.25),于20℃,每隔24h补加0.5%(V/V)的甲醇和3%(V/V)的营养液,SMD-hTopoⅠ诱导72h后可表达最高的酶活力(43000u/mL),发酵上清中hTopoⅠ可达11mg/L,约占总蛋白的10%。SDS-PAGE和Westem blot分析显示,表达的hTopoⅠ为91kD蛋白,无糖基化修饰。 相似文献
3.
利用PCR技术从重组质粒pGEM-T/HC中扩增HCcDNA片段,克隆到pPIC9k毕赤酵母表达载体中,获得重组质粒pPIC9k-HC,重组质粒线性化后电激转化入毕赤酵母GS115菌株中,重组子经G418筛选、PCR鉴定得到含外源基因的重组子,然后在含0.5%甲醇的培养基中诱导产生目的蛋白,经SDS-PAGE检测发现表达蛋白质的相对分子量约为28kD,表达量约为121mg/L,表达上清经超滤浓缩和阴离子交换层析初步纯化,所得纯化产物经Western-blot表明具有与兔抗HC血清特异性结合的能力;明胶电泳检测显示具有水解酶活性,为今后进行大规模的牛皮蝇蛆病的调查提供了一种生产大量廉价抗原的方法。 相似文献
4.
目的探讨P73蛋白在血管瘤组织中的表达及在血管瘤发生、发展中的作用.方法采用免疫组织化学S-P法分别检测(各20例)增生期血管瘤、退化期血管瘤、正常皮肤组织中P73蛋白的表达,并用HPIAS-2000多媒体彩色病理图像分析系统定量分析、比较P73蛋白在增生期血管瘤、退化期血管瘤和正常皮肤组织中的表达.结果在增生期血管瘤、退化期血管瘤和正常皮肤,P73蛋白免疫组化阳性反应颗粒的平均光密度分别为:6.408±2.151,1.073±0.516,0.953±0.120;阳性面积率分别为:0.184±0.015,0.098±0.014,0.087±0.012.增生期血管瘤与退化期血管瘤、正常皮肤组分别相比,P73蛋白阳性表达的平均光密度和阳性面积率有显著性差异(P<0.001 ) ,消退期血管瘤与正常皮肤组之间,P73蛋白阳性表达的无显著性差异(P>0.05).结论 P73蛋白在血管瘤发生发展和毛细血管内皮细胞的异常过度增生中起着重要的作用. 相似文献
5.
1.本文报告了乙型脑炎病毒经56—58℃或37℃加热灭活和福尔焉林灭括后,接种鸡胚单层捆胞不能产生干扰素,不表现有自家干扰现象,而只有当灭活材料残留有活病毒
时才能分离到干扰素。
2.由于乙型脑炎病毒经加热灭活后丧失其产生干扰素和引起自家千扰的能力,以及结合干扰素对温度稳定性的特性,这就为采职加热灭活处理此类病毒干扰素提取方法提供了依据。达一方法较pH2透析法快速、简便。 相似文献
6.
TAT蛋白转导肽介导的秀丽线虫体内外源蛋白的跨膜转导研究 总被引:1,自引:0,他引:1
TAT蛋白转导肽是HIV-1病毒编码的一段富含碱性氨基酸序列的多肽,能够高效介导多种外源生物大分子通过多种膜性结构,如细胞质膜和血脑屏障等。为探索TAT蛋白转导肽介导的秀丽线虫体内外源蛋白跨膜转导作用,以EGFP为报告基因结合常规分子克隆技术构建了原核表达载体pET28b-EGFP和pET28-TAT-EGFP,继而利用诱导剂IPTG(终浓度1mmol/L)诱导表达了靶蛋白并结合荧光显微观察、SDS-PAGE和Western blot等鉴定技术获得表达靶蛋白的大肠杆菌BL21(DE3)细胞,最后将其涂布到含有Kana+的LB固体培养基上直接饲喂野生型N2株系线虫,利用荧光显微镜观察绿色荧光信号在线虫体内的分布。结果证明,TAT-EGFP融合蛋白较之于EGFP可高效、可溶性表达,而且通过直接饲喂秀丽线虫表达靶蛋白的大肠杆菌48小时后,TAT-EGFP荧光信号明显分布于线虫肠壁细胞,而EGFP荧光信号则分布在秀丽线虫肠腔,空载体对照组未见任何荧光信号,说明TAT蛋白转导肽能够高效介导外源蛋白在秀丽线虫体内跨膜转导。同时,通过比较空载体对照组与实验组线虫微分干涉图像,未见线虫出现明显的细胞形态变化,说明TAT蛋白转导肽介导的外源蛋白跨膜转导作用是安全的,为在秀丽线虫体内直接研究外源蛋白的功能以及进行蛋白药物的研发提供了重要参考。 相似文献
8.
目的:探讨胆囊息肉的手术指征.方法:统计分析2004年01月-2008年12月间因胆囊息肉而手术病例的病理资料,通过病理类型的分布规律及大小,探求手术指征的安全标准.结果:共316例患者入组,7例胆囊癌病例中,直径均大于1.5CM.良性息肉直径在0.3-1.7CM之间,平均0.82CM.阴性病理结果占8%,良性病变占89.8%,恶性者2.2%.其中胆固醇息肉72%,腺瘤3%.炎性增生14.8%.结论:控制胆囊息肉手术指征放宽的趋势,小于1.2CM的胆囊息内建议随诊,1.2-1.5CM者,仍可采取密切随诊的措施.大于1.5CM者,采取手术治疗,有术中快速病理的腹腔镜胆囊切除术是安全的. 相似文献
9.
疫情常态化下“发酵工程”线上线下混合式教学模式的改革与探索 总被引:1,自引:1,他引:0
新型冠状病毒肺炎疫情防控常态化下,线上线下混合式教学成为了许多高校课程采用的新型教学模式。本课程团队以学生为中心,结合传统教学法(Lecture-Based Learning,LBL)和慕课教学的优点,重新构建了“发酵工程”课程的教学过程,对课程的教学目标、教学要求、教学章节、教学考核、教学方法等进行了一系列的改革探索,并尝试了线上翻转课堂和课程思政融入课堂的教学模式,学生自主学习的积极性得以提高,促进、提升了课程的教与学效果。 相似文献
10.
刺激犬颈动脉窦压力感受器所引起的呼吸反应的形式,和所用麻醉药的种类有密切关系。用硫贲妥钠、安密妥钠和巴比妥钠麻醉的动物,呼吸反应以兴奋为主。用戊巴比妥钠麻醉的动物,抑制反应略多于兴奋反应。用氯醛糖麻醉的动物,以兴奋或双相反应占多数,而在氨基甲酸乙酯麻醉下的动物,则以抑制反应为主要形式。切除两侧颈迷走神经干,能够影响呼吸反应,但和所用麻醉药的种类也有—定关系。用硫贲妥钠、安密妥钠和巴比妥钠麻醉的动物,在切断迷走神经干后,仍以兴奋为主要反应,其中部分动物的兴奋程度变得更加明显,少数动物与呼吸加强同时,呼吸频率稍为减低。用氨基甲酸乙酯、戊巴比妥钠或氯醛糖麻醉的动物切断迷走神经后有利于抑制反应的加深或发展。加深麻醉能够影响呼吸反应的程度,但是并不改变呼吸反应的形式。颈动脉窦压力感受性呼吸反应的刺激合,在我们的实验情况下以120——140毫米汞柱的最为多见,切断颈迷走神经干后,合值稍为降低。麻醉药种类不同和切断迷走神经对呼吸反应的影响以及颈动脉窦压力感受性呼吸反应的传入途径,文中曾予讨论。 相似文献