大白菜部分形态性状的QTL定位与分析

应用352个标记位点的大白菜AFLP和RAPD图谱和一套栽培品种间杂交获得的重组自交系群体,采用复合区间作图的方法对大白菜9个形态性状进行QTL定位及遗传效应研究。在14个连锁群上检测到50个QTL:其中控制株型的QTL有5个;控制株高的QTL有6个;控制开展度的QTL有5个;控制最大叶长的QTL有7个;控制最大叶宽的QTL有4个;控制叶形指数的QTL有6个;控制中肋长的QTL有7个;控制中肋宽的QTL有4个;控制抽苔的QTL有6个。另外,估算了单个QTL的遗传贡献率和加性效应。这将为大白菜品种改良中形态性状的分子标记辅助选择提供理论依据。     

大白菜霜霉菌诱导抑制性消减杂交cDNA文库的构建和分析

以抗霜霉病大白菜双单倍体系（DH）‘T12-19’为材料,构建了霜霉病诱导表达的正向抑制性消减文库,并利用反向Northern斑点杂交技术对768个阳性克隆进行了筛选,共获得57个病原菌诱导上调表达的克隆。测序后得到55条通读表达序列标签（ESTs）,对这些ESTs序列进行聚类和拼接分析,共获得50个unigenes。Blast分析表明,37个unigenes与已知基因高度同源,占全部非重复序列的67.3%。对已知功能基因按MIPS的分类方法进行功能分类,发现这些基因的功能主要涉及物质与能量代谢、转录调控、蛋白质合成与代谢、膜及转运、信号转导、抗病防御等。为了验证文库筛选结果的可靠性,采用实时荧光定量PCR技术分析了其中2个克隆BFCH10和BFIA7的表达谱。结果表明,这2个克隆在接种病菌6h后明显上调表达,与反向Northern斑点杂交结果基本一致。     

大白菜骨干自交系的苗期抗病性评价

为明确大白菜骨干自交系的抗病性,本研究于2012-2014年,对课题组保存和创制的203个大白菜自交系进行了霜霉病、病毒病、黑腐病、黄萎病和根肿病的苗期抗性评价。结果显示,高抗上述病害的自交系分别有7、9、0、31和12个;只抗其中一种病害的自交系82个;兼抗两种病害的有61个,兼抗三种病害的自交系有28个,兼抗四种病害的自交系有4个。自交系11-234、04-622、12-85、13-108和09-894综合抗病性最优。此外,春大白菜、夏大白菜和秋大白菜三种生态类群间,以及四种叶球抱合类群间的抗病性表现出明显差异。     

由基因序列开发番茄枯萎病抗性基因Ⅰ-2的共显性分子标记

根据Ⅰ-2的基因序列设计特异扩增引物对Ⅰ-2/5F和Ⅰ-2/5R,扩增Ⅰ-2基因3 132～3 765 bp之间片段,基因型为Ⅰ-2/Ⅰ-2的材料03F-7可扩增出633 bp的条带.而基因型为I-2/I-2的材料Moneymaker可扩增出693 bp的条带,杂合型材料可扩增出以上2个条带.通过这两个特异扩增片段的克隆和测序证明,抗病材料扩增的633 bp片段为Ⅰ-2基因的3 132～3 765 bp之间的序列,而感病等位基因中出现大量的碱基突变和60 bp片段插入.利用引物对Ⅰ-2/5F和Ⅰ-2/5R,可区分纯合抗病材料、杂合抗病材料和纯合感病材料,从而建立了Ⅰ-2基因的共显性分子标记.在此基础上,利用该标记对16个主要番茄品种进行基因型鉴定,8个品种含有,Ⅰ-2基因,其中1个品种基因型为Ⅰ-2/Ⅰ-2,其他品种为Ⅰ-2/I*2.通过一次PCR和一次HindⅢ酶切建立了Ⅰ-2和Tm-22双基因检测体系,为多基因鉴定及标记辅助选择提供了有力工具.     

由基因序列开发番茄枯萎病抗性基因I-2的共显性分子标记

根据I-2的基因序列设计特异扩增引物对I-2／5F和I-2／5R，扩增I-2基因3132～3765bp之间片段，基因型为I-2／I-2的材料03F-7可扩增出633bp的条带，而基因型为i-2／i-2的材料Moneymaker可扩增出693bp的条带，杂合型材料可扩增出以上2个条带。通过这两个特异扩增片段的克隆和测序证明，抗病材料扩增的633bp片段为I-2基因的3132～3765bp之间的序列，而感病等位基因中出现大量的碱基突变和60bp片段插入。利用引物对I-2／5F和I-2／5R，可区分纯合抗病材料、杂合抗病材料和纯合感病材料，从而建立了I-2基因的共显性分子标记。在此基础上，利用该标记对16个主要番茄品种进行基因型鉴定，8个品种含有I-2基因，其中1个品种基因型为I-2／I-2，其他品种为I-2／i-2。通过一次PCR和一次HindⅢ酶切建立了I-2和Tm-2^2双基因检测体系，为多基因鉴定及标记辅助选择提供了有力工具。     

由基因序列开发番茄枯萎病抗性基因Ⅰ-2的共显性分子标记

根据I-2的基因序列设计特异扩增引物对I-2/5F和I-2/5R, 扩增I-2基因3 132～3 765 bp之间片段, 基因型为I-2 / I-2的材料03F-7可扩增出633 bp的条带, 而基因型为i-2/ i-2的材料Moneymaker可扩增出693 bp的条带, 杂合型材料可扩增出以上2个条带。通过这两个特异扩增片段的克隆和测序证明, 抗病材料扩增的633 bp片段为I-2基因的3 132～3 765 bp之间的序列, 而感病等位基因中出现大量的碱基突变和60 bp片段插入。利用引物对I-2/5F和I-2/5R, 可区分纯合抗病材料、杂合抗病材料和纯合感病材料, 从而建立了I-2基因的共显性分子标记。在此基础上, 利用该标记对16个主要番茄品种进行基因型鉴定, 8个品种含有I-2基因, 其中1个品种基因型为I-2 / I-2, 其他品种为I-2 / i-2。通过一次PCR和一次HindⅢ酶切建立了I-2和Tm-22双基因检测体系, 为多基因鉴定及标记辅助选择提供了有力工具。