体内精原干细胞转染法建立转基因小鼠

将人Bcl-2 cDNA与小鼠乳清酸蛋白(WAP)5’上游调控序列融合后,与脂质体按一定比例混合,再加入适量的台盼蓝制成转染液,注入到小鼠睾丸中的曲细精管中,转染精原干细胞以探讨建立转基因小鼠的可行性。共注射了3只公鼠,4天后将公鼠与发情母鼠合笼交配,共生仔鼠20只。检测结果表明,有3只呈PCR阳性,Southern blot检测,阳性鼠2只,1只公鼠,1只母鼠,其中,公鼠意外死亡;Western blot证实,1只母鼠的乳腺组织表达了Bcl-2蛋白,其F1代的16只小鼠中,有7只呈PCR阳性。证实了体内精原干细胞转染建立转基因动物的可行性。     

人红细胞生成素乳腺特异性表达载体构建及其可行性检验方法的建立

将大鼠乳清酸蛋白（ＷＡＰ）基因的上游调控序列与人红细胞生成素基因组ＤＮＡ融合,构建了ｐＷＡＰ－ＥＰＯ－ＷＡＰ３乳腺特异性表达载体,该载体经脂质体包裹后,通过显微外科技术,经乳腺导管注入妊娠中后期大鼠乳腺中进行表达。经ＥＬＩＳＡ检测,大鼠乳汁中有ＥＰＯ表达,外周血网织红细胞计数法测定表达的ＥＰＯ具有体内生物活性,说明乳腺导管注入法是一种较理想的评价乳腺特异性表达载体可行性方法     

体内精原干细胞转染法建立转基因小鼠

将人Bcl-2 cDNA与小鼠乳清酸蛋白(WAP)5’上游调控序列融合后,与脂质体按一定比例混合,再加入适量的台盼蓝制成转染液,注入到小鼠睾丸中的曲细精管中,转染精原干细胞以探讨建立转基因小鼠的可行性。共注射了3只公鼠,4天后将公鼠与发情母鼠合笼交配。共生仔鼠20只。检测结果表明,有3只呈PCR阳性,Southern blot检测,阳性鼠2只,1只公鼠,1只母鼠,其中,公鼠意外死亡;Western blot证实,1只母鼠的乳腺组织表达了Bcl-2蛋白,其F1代的16只小鼠中。有7只呈PCR阳性。证实了体内精原干细胞转染建立转基因动物的可行性。     

用鼻咽相对特异性调控区建立N-LMP1转基因小鼠

为了研究EBV LMP1在鼻咽癌发生发展中的作用 ,构建了EDL 2、PLUNC p双启动子调控鼻咽癌来源的LMP1(latentmembraneprotein 1,潜伏膜蛋白 1)的表达载体 ,采用受精卵前核显微注射法构建转基因小鼠。结果表明 ,在所获得的 5 8只转基因首建鼠中 ,4只整合阳性 ,其中的一只转基因小鼠在鼻咽、前胃、舌根等部位检测到了外源基因的表达。     

一种新型的可调控性真核表达载体

最近Gossen等报道了一种新型的可调控性真核表达载体,其主要特点是在真核启动子的上游融合了四环素操纵子结构,通过控制四环素操纵子的开启(on/off)从而启动转录的开始,使得外源基因获得表达。这种结构在转基因动物及基因治疗上有着良好的应用前景。 四环素操纵子结构的开启是在四环素衍生物如强力霉素等的作用下,四环素转录激活物