家蚕不同地理品种分子系统学研

 利用随机引物扩增多态性DNA(RAPD)标志，在DNA分子水平上对不同系统、化性和眠性共六类59个家蚕Bombyx mori品种及野蚕且mandarina之间的遗传差异进行了研究。在34个随机引物中有12个(35.29%)引物出现稳定的扩增带，扩增总带数为103条，其中86条具多态性，占83.5%，平均每个引物7.2条。利用单匹配相似系数和UPGMA聚类法对结果进行分析，发现其RAPD不但具有品种特异性，而且具有系统特异性，证明中国一化性四眠种为最早从野蚕中分化出来的系统，中国一化性三眠种与中国一化性四眠种在进化上属有显著差异的两个类群。  

分子系统学研究中分子位点数与遗传差异信息可靠性的关系 The Correlation Between the Number of RAPD-loci and theReliability of the Information on Genetic Variation in MolecularPhylogenetic Studies

用桑蚕(包括不同生态地理品种59个及野桑蚕)和桑属植物(包括12个种和2个变种)两类截然不同的材料,探讨了分子系统学研究中RAPD分子位点数与遗传差异信息可靠性间的关系。发现:(1)所分析的位点数多少与所能提供系统信息的量及可靠性之间有明显的关系;(2)当位点数在20以下时,得到的遗传差异的结果极不可靠,随着位点数的增加所提供的信息量及可靠性增加。当位点数超过70个时,所提供的信息可靠性趋于稳定;(3)对桑蚕和桑属植物两种截然不同的材料的分析,均得相似结果。由此推论:在用RAPD进行生物系统学研究中,以分析70个左右位点数为好;这一结论受研究对象的影响小,在其它类似的研究中或许具有一定的参考价值。 Abstract:We studied the correlation between the number of RAPD-loci investigated and the reliability of the information on genetic variation analysis using quite different two-kind materials,silkworms(including 59 geographic varieties of Bombyx mori belonging to different ecotype,as well as Bombyx mandarina M.)and mulberries(including 12 species and 2 varieties).The results showed as follows:(1)There was obvious correlation between the numbers of RAPD-loci investigated and the reliability of the information on genetic variation analysis.(2)The data were not suitable for the genetic variation analysis when the number of RAPD-loci in vestigated was smaller than 20.The more RAPD loci were analyzed,the more accurate genetic diversity would be identified when the number of the locus was varied from 20 to 70.Furthermore,the stable information to be available is shown when the number exceeded 70.(3)The similar regularities mentioned above were observed in both silkworm and mulberry.In order to get reliable information of genetic variation in molecular phylogenetic studies,at least 70 RPD loci would be investigated.And the results obtained in this study might be referential for AFLP and RFLP analysis.  

家蚕AFLP连锁框架图谱的构建

 利用改进的AFLP分子标记方法，对家蚕Bombyx mori回交一代BC1群体进行连锁图谱的构建。经17组AFLP引物的选择性扩增，共得到430个多态位点，卡方检验后有253个为有效位点。利用Mapmaker/Exp (Version 3.0b)软件作连锁分析，其中163个标记分属28个连锁群，连锁群标记数变化范围是2～28个，平均每个连锁群标记数为5.8个，该图覆盖的基因组长度为2.998.9cM(图距单位)，连锁群长度变化范围为4.5～652.8 cM，连锁群的平均长度为107.1 cM，平均图距为4.5～36.7 cM。  

中国野桑蚕遗传多样性的AFLP分析

采用AFLP技术对我国具有代表性的7个省市的10个野桑蚕(Bombyx mandarina)种群和2个家蚕（Bombyx mori)品种的遗传多样性进行了研究。结果表明：杭州、陕西和重庆3个地区的野桑蚕种群间及种群内个体间的遗传距离都比家蚕品种大。野桑蚕存在广泛的变异，7个省市的10个野桑蚕种群之间的遗传距离为0．164－0．444（平均值为0．3826），平均杂合度为0．7061，表明野桑蚕自然群体的遗传多样性十分丰富。  

利用精子介导法向蚕卵导入外源基因的研究

为建立家蚕转基因中切实可行、操作简便的外源基因导入方法，进行了精子介导法探索，以精子介导法的三种方式向家蚕导入所构建质粒pFbGFP，并通过PCR扩增和DNA印迹等手段，已连续两代从基因组DNA检测到导入外源基因GFP的存在，其中的一种导入方式到第二代阳性率约30% .结果表明该法可有效进行家蚕转基因的外源基因导入.  

家蚕白卵突变新系BT924的遗传学研究 Genetical Research of BT924―A New Line in White Egg Mutants of Silkworm

新的家蚕白色卵突变系BT924是由蓖麻蚕DNA导入家蚕品种苏学5诱导获得。性状特征：滞育卵当年白色，越年后呈浅黄褐色；蛾区内及区间卵色略有变异，幼虫皮肤低度透明，成虫复眼黑色。采用家蚕卵色正常型（黑卵）和突变型红色卵（re）、桃红眼白卵（pe）、第2白卵（w－2）、第3白卵（w－3）及BH863油蚕白卵（w－3bh）与之杂交，进行遗传分析，结果表明，BT924白卵及其油蚕性状由隐性单基因控制，普通遗传，基因座与w－3相同，即：10－19.6。命名为：white egg BT924，基因符号：w－3bt。w－3bt对re表现上位作用。同时发现家蚕基因库保存的桃红眼白卵（pe）标记基因系pe000同时持有红色卵（re）基因，其卵色基因型为re pe/re pe。 Abstract:A new line in white egg mutants of silkworm (Bombyx mori)―BT924 was derived from incorporation of eri?silkworm (Philosamia cynthia ricini Donovan) DAN into the silkworm race “Su Xue 5”.It has the following characteristic traits:The diapause eggs are white in color in the hiberating year and become fawn after hiberation; Slight intra-and inter-batch variation in gee color may exist; Larval skin is slightly translucent; And the compound eyes of the imagos are black.In the present research,the new white egg mutant line was crossed with a normal silkworm race(black egg) and with the mutant lines re,pe,w－2,w－3 and w－3bh for genetical analysis.White egg of BT924 together with its translucency was shown to be controlled by a single recessive gene and share the same locus with w－3(10－19.6). It has been named“white egg BT924”with the gene symbol w－3bt. w－3bt is epistatic to re.In addition,the marker gene line pe000 of pe maintained in the laboratory was shown to carry the re gene as well,its genotype being re pe/re pe.  

家蚕AFLP分子连锁图谱的构建及绿茧基因定位

利用改进的AFLP技术，对家蚕品系C100和大造的回交一代BC，群体进行连锁图谱的构建。经28对引物组合的选择性扩增，共获得了3956条带，平均每对引物产生141．3条带，获得多态性带只有1018条，多态性带的比率为25．7％。其中693(68．1％)个多态性位点符合1：1孟德尔分离比例。利用Mapmaker／Exp3．0软件进行连锁分析，构建了一张含有408个标记位点、33个连锁群、总图距为3676．7cM的连锁图谱，并将绿茧基因定位在该图谱的22连锁群上，表明该连锁群与家蚕经典遗传学的第15染色体相对应。  

黄连ISSR反应条件优化的研究

以黄连(味连，Coptis Chinensis Franch.)基因组DNA为模板，通过单因子、双因子实验研究了ISSR反应体系中主要成分（Mg²⁺、dNTP、引物、模板、Taq DNA聚合酶）以及热循环参数（退火温度、循环数、变性时间、退火时间、延伸时间）对扩增结果的影响，并找出各自的最适条件，建立了适合黄连ISSR分析的反应体系和扩增程序，即在25μL反应体系中，内含1×PCR buffer、1.5mmol·L^-1 Mg²⁺、200μmol·L^-1 dNTP、0.3 μmol·L^-1引物、40 ng模板、1 U TaqDNA聚合酶。扩增程序为94℃预变性5 min，然后进行35个循环：94℃变性30 s，（据不同引物的退火温度）复性1 min，72℃延伸1.5 min，循环结束后72℃延伸7 min，-4℃保存。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术进行黄连鉴定及种质遗传多样性分析提供了一个标准化程序。  

基于RAPD分析的中国野桑蚕和家蚕遗传多样性和系统发育关系研究

 对具代表性的中国11个地区的野桑蚕Bombyx mandarina进行了随机引物扩增多态性DNA(RAPD)分析，结果表明：不同地区的野桑蚕的遗传距离较大，最大为0.465(安康-镇江)，最小的也有0.209(武汉-合肥)；同一地区不同个体野桑蚕的遗传距离也较大，最大为0.318，最小的为0.144。它们均远大于家蚕B.mori品种内个体间的遗传距离(最大为0.068、最小为0.015)，甚至超过了家蚕品种间的遗传距离(最大为0.258、最小为0.197)。这表明中国野桑蚕是一个十分混杂的、遗传多样性非常丰富的群体。另外，在大多数情况下野桑蚕的遗传距离表现出与空间距离正相关。遗传距离和系统发育分析结果显示陕西一带的野桑蚕成分复杂，有重要的演化意义。  

结合SADF与RAPD标记构建家蚕连锁图

 用40个选择性扩增多态性引物和137个随机性扩增多态性引物对家蚕Bombyx mori F₂群体进行分子标记的筛选。获得544个符合遗传分离比的多态性位点，并用Mapmaker软件进行连锁分析。在最小LOD值为4，最大重组值为0.2条件下拆分连锁群，并对处于同一连锁群的位点进行合理排序，计算出位点间的重组值后转换为图谱距离，构建了一个家蚕的分子连锁图。