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用天花粉蛋白基因转化小麦获得转基因植株   总被引:11,自引:0,他引:11  
取普通小麦品种京411未成熟胚诱导愈伤组织,10天左右,对820个胚性愈伤组织用含有35S启动子的天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)基因轰击。2周后,将这些被轰击的愈伤组织转到含潮霉素50mg/L的筛选培养基上,经分化和生根,获得了33棵再生植株,经接饲毒蚜虫抗病性鉴定和PCR,Southern杂交分析,从中筛选出4株含有编码TCS的转基因小麦植株,转化频率为0.49%。  相似文献
3.
天花粉蛋白基因的克隆及序列分析   总被引:7,自引:0,他引:7  
本文应用DNA多聚酶链式反应(PCR)技术,从括楼基因组DNA中扩增并克隆了天花粉蛋白(TCS)基因。核酸序列分析结果表明,克隆片段包括TCS的前原蛋白的编码序列和5'一侧翼区段。其编码序列与已发表的不同来源的3种TCS基因的核苷酸序列的同源性分别为99.20%,98.74%和98.64%。推导出的氨基酸序列与已发表的4种TCS的氨基酸序列的同源性分别为98.62%、98.62%、97.41%和9  相似文献
4.
天花粉蛋白Y14F/R22L定点突变及其活性研究   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
 利用多聚酶链式反应(PCR)技术,对天然天花粉蛋白(nTCS)基因在Tyr14和Arg22两个保守残基处同时进行定点突变,即Tyr14变成Phe,Arg22变成Leu,然后克隆到pET-8c高效表达载体上,构建成重组质粒pETY14F/R22L.经序列分析,定点突变的结果与预先设计的完全一致,突变后的天花粉蛋白命名为Y14F/R22LTCS.将pETY14F/R22L转化到E.coliBL21(DE3,pLysS)中,进行表达.经CM-SepharoseCL-6B柱纯化,SDS-PAGE鉴定,纯度可达90%.RIP活性测定显示,Y14F/R22LTCS的活性比nTCS降低了7.5倍,活性变化不显著,因此,TCS的Try14和Arg22对维持其活性部位构象并不是必需的.但由于Y14F/R22LTCS在E.coli中的表达量与nTCS相比明显下降,因此,Tyr14和Arg22可能与TCS翻译后的折叠有关.  相似文献
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