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1.
为了研究体内表达的脑源神经营养因子(Brain-derivedNeurotrphicfactor,BDNF)对脊髓运动神经元存活及切断神经再生的作用,我们将人BDNFcDNA克隆到真核表达载体pCB6中,使BDNF基因在CMV启动子控制下表达。在雏鸡出生后3小时内及第二天直接将pCB-BDNFcDNA·lipofectin混合物注射到坐骨神经预切断位点附近肌肉内。第二天切断坐骨神经,神经切断10天后进行实验检测,观察到,BDNFcDNA转染阻止了切断神经一侧的腰脊髓内(L4-L6)运动神经元的大量死亡。并显著的促进了切断坐骨神经的再生。这些结果表明直接注射含BDNFcDNA的质粒对损伤的神经进行基因治疗,具有良好的前景;lipofectin介导重组质粒进行基因转染是导入外源基因到体内的一个可行方法。  相似文献
2.
人脑源性神经营养因子基因表达   总被引:6,自引:0,他引:6       下载免费PDF全文
用聚合酶链式反应(PCR)从人基因组DNA中扩增了人脑源性神经营养因子(hBDNF) cDNA和hBDNF成熟蛋白编码片段,分别克隆到pUC18中.经测序确认两个插入片段序列正确.hBDNF cDNA在CMV启动子控制下在NIH/3T3细胞中表达,用RT-PCR检测转染细胞确有BDNF mRNA存在.BDNF成熟蛋白编码序列在T7启动子控制下在E.coli中表达,SDS-PAGE表明,BDNF得到表达,以包涵体形式存在.  相似文献
3.
针对SARS冠状病毒重要蛋白的siRNA设计(英)   总被引:4,自引:0,他引:4       下载免费PDF全文
RNA干涉(RNA interference, RNAi)是一种特异性地导致转录后基因沉默的现象,在哺乳动物细胞中小分子干扰RNA双链体(small interfering RNA duplexes, siRNA duplexes)可以有效地诱导RNAi现象,为一些疾病的治疗开辟了新的途径.针对SARS冠状病毒(SARS coronavirus, SARS-CoV)中编码5个主要蛋白质的基因,用生物信息学的方法设计了348条候选siRNA靶标.在理论上,相应的siRNA双链体能特异地抑制SARS-CoV靶基因的表达,同时不会影响人体细胞基因的正常表达,这为进一步siRNA类药物的实验研究提供了理论基础.  相似文献
4.
GDNF及BDNF对受损运动神经元的长期修复   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
为了研究胶质细胞源神经营养因子(GDNF) 及脑源神经营养因子(BDNF) 对切断轴突的新生运动神经元的长期维持存活及促进神经再生的作用, 我们选用出生时单侧切断坐骨神经的雏鸡模型, 用裸DNA 转染方法, 在损伤神经附近的肌肉中转染GDNF cDNA 和BDNF cDNA 的真核表达载体,观察在体表达的神经营养因子对损伤的修复作用。结果显示,在体表达的GDNF 在8 周内能使切断坐骨神经的腰脊髓运动神经元近90 % 维持存活。切断的坐骨神经从断端向远体端再生,最长再生达9 .5m m 。表达两个因子比单独表达GDNF 对运动神经元的存活无显著性差异。而两个因子协同作用对坐骨神经的再生更为有效,坐骨神经再生最长的可达15 .4m m 。  相似文献
5.
老龄ICR小鼠对SARS-CoV的易感性   总被引:2,自引:1,他引:1  
目的为探讨SARS的发病机制并提供易感的SARS动物模型。方法利用RT-PCR和病毒分离后免疫荧光技术检测成龄鼠和老龄鼠接种SARS-CoV后肺组织内病毒复制情况,同时观察两组动物的肺脏和肺外组织器官的病理变化,对肺组织进行免疫组化分析,观察SARS-CoV在肺内复制的主要部位。结果老龄鼠的感染率明显高于成龄鼠;老龄鼠肺脏出现更为严重的弥漫性肺泡损伤,其中两只老龄鼠的肺外器官出现了变性、灶状坏死以及血管广泛的扩张充血等全身中毒性变化;肺脏内病毒抗原主要存在于肺泡上皮细胞和间质的血管内皮细胞。结论老龄ICR小鼠对SARS-CoV的易感性明显高于成龄鼠,有可能作为研究SARS发病机制以及药物评价的动物模型。  相似文献
6.
H5N1型禽流感病毒感染非人灵长类动物的观察   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的观察H5N1型禽流感病毒对中国非人灵长类动物的易感性并建立动物模型。方法将病毒通过滴鼻接种实验猴,观察感染后动物的临床症状,采血、咽拭子及各器官组织进行血清学、病原学及病理学检查,记录抗体变化、病毒分离情况及病理学改变。结果感染后动物表现轻度食欲下降、一过性体温升高及外周血白细胞减少,肺组织病毒分离及RT-PCR阳性,病理检查感染急性期动物肺组织表现为间质性肺炎,肺泡间隔增宽,充血出血明显,肺泡受压变形,间质及肺泡内有大量炎细胞浸润,符合病毒性肺炎的改变,感染后14 d动物血清IgG抗体水平较感染前升高4倍。结论H5N1病毒可感染非人灵长类动物,可以作为感染模型进行H5N1病毒的发病机制、疫苗评价、药物筛选等研究。  相似文献
7.
恒河猴感染SARS-CoV的病毒学、血清学检测   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的对感染SARS-CoV的8只恒河猴进行病毒学、血清学指标检测。方法SARS-CoV经鼻腔接种8只恒河猴,在感染的第1天开始到5、7、10、15、20、30和60天分别安乐处死时,不同时间取咽拭子、血液和脏器,进行病毒分离,RT-PCR检测和抗体测定。结果RT-PCR证实感染病毒检出时间为5~16d,8只猴中的5只分离到了病毒,感染15d后可检测到抗体。结论感染SARS-CoV的恒河猴不仅出现与SARS患者类似的临床和病理学改变,也在一定时期内排毒,出现特异免疫反应,这些指标均可作为药物筛选、疫苗评价等方面的重要参数。  相似文献
8.
SARS-CoV恒河猴模型动物中组织病理学动态变化   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的在感染的8只恒河猴的SARS-CoV模型动物中,观察肺等组织中出现的系列病理学改变,为针对抗SARS药物筛选、疫苗评价中的免疫病理反应等奠定实验依据。方法SARS-CoV经鼻腔接种8只恒河猴,在感染的第5、7、10、15、20、30和60天,分别安乐处死动物,组织病理取材,制片,观察。结果经病毒分离和RT-PCR证实动物感染是成功的。系列病理改变表明,早期肺组织可见间质性肺炎,水肿、结构破坏、出血,巨噬细胞浸润;后期出现内皮细胞受损及再生,透明膜形成,小血管玻璃样变,肺组织纤维化及肺气肿形成,肺泡网状纤维和弹力纤维破坏并增生等,脾脏、淋巴结生发中心早期有萎缩,后期有恢复等病理学改变均和SARS患者相似。结论感染恒河猴出现与SARS患者类似的临床和病理学改变,为进一步研究该病毒的病原特性、发病机理、药物筛选、疫苗评价等方面的研究奠定了重要基础。  相似文献
9.
 为了研究GDNF在神经系统中的生物学功能,通过RT-PCR方法从大鼠睾丸总RNA中扩增出GDNFcDNA全序列,序列分析表明与GenBank中的顺序完全相同.将GDNFcDNA以非融合方式连接在真核表达载体pEGFP-NⅠ的绿色荧光蛋白的上游,在CMV启动子控制下表达.通过绿色荧光蛋白报告基因的表达表明GDNFcDNA能在真核细胞HeLa中很好表达.采用裸DNA转染方法研究GDNF对损伤的坐骨神经的修复作用,在雏鸡出生后3h切断其右侧坐骨神经,将pEGFP-GDNF与Lipofectin的混合物注射到坐骨神经切断位点附近肌肉内,5d后追补一次.20d后进行实验检测,观察到GDNFcDNA的转染阻止了切断神经侧的腰脊髓内[L4-L6]运动神经元的大量死亡,并显著促进了切断坐骨神经的再生.  相似文献
10.
SARS冠状病毒分离培养和鉴定的实验研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
建立严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒分离、培养方法,为SARS冠状病毒动物模型的建立提供实验依据,并根据病毒在体内存活的时间确定检测指标。选用已鉴定为SARS冠状病毒的毒株,经过鼻腔接种感染恒河猴。定期采集咽拭子标本,分离血清或血浆,用Vero细胞进行病毒培养、分离。结果显示,在SARS冠状病毒感染恒河猴后2、5、7天,可以从拭子中分离到病毒,5~15天可在猴肺、脾、肝、肾和淋巴组织中分离到病毒,并用免疫荧光法和RT-PCR方法进行了确定。首次实验证实了SARS冠状病毒可在恒河猴体内复制。SARS病毒的成功分离是SARS冠状病毒动物模型建立的主要依据,在进行疫苗安全性和药效评价等工作中,病毒分离可作为药物筛选、疫苗评价的重要指标。  相似文献
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