重组人骨形态发生蛋白-6的表达、纯化及其活性分析

利用RT-PCR从人胎盘组织中获取BMP-6成熟肽的cDNA 片段，并克隆到表达载体pET-15b中， 构建hBMP_6成熟肽的非融合蛋白表达质粒pET-BMP6，转化E.coli BL21（DE3）。IPTG 诱导4h后，工程菌高表达rhBMP-6成熟肽，在SDS-PAGE上出现预期的新蛋白带(≈15kD)， 约占菌体总蛋白的10%，表达产物以包涵体形式存在。分离和纯化的包涵体溶解于8 mol/L尿素，在变性溶解状态下经阳离子交换层析,得到目的蛋白纯度达95%以上。再经稀释复性后，约80%的rhBMP-6形成同源二聚体。体外活性分析结果显示：rhBMP-6可以提高C3H10T1/2 细胞碱性磷酸酶活性及促进I型胶原、Osterix（Osx）和骨钙素（Osteocalcin）等成骨细胞表型转化标记基因mRNA的表达，证明制备的rhBMP_6具有诱导非骨源性细胞分化成为成骨细胞的作用。  

固定化青霉素G酰化酶水解头孢菌素G制备7—ADCA的研究

用聚丙烯腈纤维固定化青霉素酰化酶水解头孢菌素G制备7-ADCA,固定化酶对头孢菌素G的最适pH为9.0,最适温度50℃。在37℃、pH8.0固定化酶对头孢菌素G的表观米氏常数为1.67×10~(-2)mol/L。最大反应速度为3.01mmol·g~(-1)·min~(-1)。头孢菌素G溶液浓度在2％以上时,对固定化酶有明显的抑制作用。固定化酶水解头孢菌素G的最佳投料浓度为5％～6％,水解时用酶量以每克头孢菌素G投300U以上为好。按上述条件水解头孢菌素G,操作25批后固定化酶保留活力77.8％,7-ADCA平均收率92.68％。  

植物化感抑藻的作用机理

对植物化感物质抑藻机理,即化感物质影响藻细胞的光合作用、破坏细胞膜、改变细胞酶活性、影响细胞超微结构及基因表达等几个方面进行了综合评述.研究表明,化感物质主要通过降低叶绿素a含量,破坏光合系统Ⅱ,使细胞膜结构裂解,酶活性改变,抗氧化系统破坏,细胞膜内超微结构受损,基因表达异常等几个方面来抑制藻细胞的分裂或直接杀死藻细胞,从而减少藻细胞数量,抑制藻类的生长.未来应该从更微观角度,即基因表达、分子和遗传机制等方面对化感抑藻机理进行深入研究,以期为开发安全、高效的抑藻化感物质提供理论基础.  

植物激素受体研究进展

植物激素对植物的生长发育以及在植物应对逆境方面具有重要的调节作用，植物激素受体是植物激素信号转导途径中的一个关键环节，倍受关注。近年来，由于生物化学与分子生物学和遗传学结合，使得植物激素受体的研究取得了很大进展。综述了5种经典植物激素受体以及油菜素内酯和茉莉酸受体在生物化学、遗传学和分子生物学三个层面上的研究成果，旨在为进一步研究植物激素作用机制提供参考资料。  

鉴别伪狂犬病病毒野毒与疫苗毒荧光定量PCR方法的建立

根据猪伪狂犬病病毒(PRV) gH、gE基因的序列, 设计了两对引物及其对应的TaqMan探针, 通过对引物、探针、Mg2+的浓度和样品DNA提取方法等进行优化, 建立了鉴别PRV野毒与疫苗毒感染的荧光定量PCR方法。该方法线性范围为101~108拷贝/mL, 达8个数量级, 灵敏度可达101拷贝/mL, 比常规PCR高100倍。用此方法对60份疑似组织样品进行检测, 并与血清中和试验、常规PCR相比较, 结果显示该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能对样品进行定量检测等优点, 并且该法以闭管的模式操作, 减少了后续步骤污染的可能性, 整个PCR检测过程不到2 h。此方法的建立, 为猪伪狂犬病病毒的早期鉴别诊断和定量分析猪伪狂犬病病毒感染程度奠定了基础。  

抗重金属汞离子抗体的制备及鉴定?

汞、镉、铅等重金属引起的环境污染已在世界范围内造成危害。快速、廉价地监测生境中重金属是减小其对人类及动物危害的先决条件。传统检测方法无法满足高通量的现场检测，建立更快速、更经济的免疫分析法检测汞离子是生产及经济发展的需要。本研究中，报道了汞特异性单克隆抗体的制备与筛选方法和结果。因Hg2+太小以至于不能引起免疫反应，所以用螯合剂 (二乙烯三胺五乙酸，DTPA) 将金属离子与载体蛋白 (匙孔血蓝蛋白，KLH) 连接起来。成功合成、鉴定汞复合物抗原后，免疫BALB/c小鼠，通过细胞融合获得了稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。用极限稀释法亚克隆，通过ELISA筛选，获得了2株稳定分泌抗汞离子抗体的细胞株 (H2H5，H1H8)。小鼠腹腔注射1×107 H2H5、H1H8细胞株制备腹水，腹水抗体效价都在1∶51 200以上。经鉴定两株杂交瘤均为IgG1亚类，轻链为kappa型且分泌抗体稳定性较好。实验结果为汞离子残留免疫学检测方法的建立提供了技术基础，对提高风险评估工作的效率和质量，保障食品安全有重要现实意义。  

基于生态敏感性和生态系统服务价值的昌黎县生态廊道构建

生态廊道的作用在于提供生物迁徙的路径、促进不同栖息地之间的物种交流.廊道的构建能够减轻因城市化速度加快导致景观破碎化带来的危害,对生物多样性的保护具有十分重要的意义.本文以昌黎县为研究区,以2015年土地利用现状为基础,采用生态敏感性评价和生态系统服务价值分析的综合结果确定生态源地,然后基于最小累积阻力模型(MCR)和最小成本路径方法生成潜在廊道,根据重力模型对关键廊道进行识别,最终得到研究区包括4条重要廊道和2条一般廊道在内的生态廊道体系,旨在促进昌黎县生态廊道建设工程的科学实施和保护生物多样性.结果表明:研究区生态敏感性总体一般,生态系统服务价值总体较差,两者均呈现出四周高于中间的特点.生态源地主要分布在北部碣石山风景区、东部滨海国有林场和西部水源保护地这3个区域,与研究区生态环境建设与保护规划(2011—2030年)确定的自然保护区高度吻合.研究区生态廊道总长112.66 km,其中,重要廊道47.61 km,一般廊道65.05 km,廊道的最佳宽度范围为30~60 m,生态廊道与生态源地大致构成了一个环形闭合区域,能够有效促进生物物种的迁徙和物质能量的交流.  

深层海洋浮游植物研究综述

对深层海洋(200 m)浮游生物的研究是我国海洋浮游生物研究的前沿,已有的深层海洋浮游生物知识是我国相关研究的基础。浮游植物需要阳光进行光合作用,大多数浮游植物沉降到深海中会死亡,但有些浮游植物却能在深海中生存。综述深层海洋中存活的浮游植物的研究进展,为我国的研究提供参考。在深层海洋发现的浮游植物(2"m)种类不多,共有18种,最深分布在4000 m,颗石藻的丰度大于硅藻和甲藻,最大丰度为2220个/L,出现在500 m。在1911—1985年期间,曾经发现橄榄绿细胞,由于研究手段有限,一直没有对其进行分类学研究。1985年以后的研究怀疑这些橄榄绿细胞就是聚球藻蓝细菌,聚球藻蓝细菌在太平洋、大西洋和地中海的几个站位能分布到2750 m,在深层海洋的最大丰度为3.5×105个/mL,出现在800 m。在许多海区200—700 m发现有浮游植物色素荧光的高值,但对引起高值的原因尚不清楚。浮游植物生物量在深层海洋的垂直剖面研究不多,已有的研究表明浮游植物生物量在300 m以深为0.001—0.1"g C/L,且其随深度增加而降低。  

湖北省野生药用植物资源现状

对湖北省野生药用植物资源种类、地道植物药材种类、中国特有科、属、种和珍稀、濒危物种等在湖北省的分布情况进行了分析,为政府制定有力的资源保护政策以及湖北省和全国的生物物种(含野生物种,药用动、植物物种)保护执法评估标准的制定提供了科学依据。  

胃粘蛋白

一般说来 ,粘蛋白是专指高糖基化的 ,且能形成人体粘液凝胶结构主要成分的各种不同糖蛋白。研究已证实 ,它有保护和识别细胞 ,维持分泌过程中的粘滞性以及参与对组织和器官构成防御等生理功能。粘蛋白特殊的性质由它们各具特色的结构所决定 ,各种粘蛋白是通过丝氨酸和苏氨酸残基与Ｎ 乙酰半乳糖胺 ,靠Ｏ 糖苷键把低聚糖跟多肽骨架连在一起[1] 。胃粘蛋白特有的生物活性和实际应用吸引了人们对它深入的研究。1 .胃粘蛋白的性质胃粘蛋白源于上皮细胞分泌 ,由多糖基化的多肽组成的大分子量的糖蛋白[2 ] ,它能保护胃壁免受化学、微生物、酶以及…