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1.
为研究NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况,以永生化食管上皮细胞系SHEE和食管癌细胞系SHEEC互为对照,用cDNA微列阵进行筛选,用RNA印迹和RT-PCR进行鉴定,cDNA克隆测序后与GenBank进行BLAST分析比较.结果表明NGAL基因在SHEEC中出现显著差异过表达,其cDNA序列与小鼠24p3、大鼠NRL(neu-related lipocalin)、人中性粒细胞NGAL和卵巢癌NGAL具有较高的相似性.这提示NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中可能发挥着重要作用,可能是一种新的癌基因或促癌基因.  相似文献
2.
SHEEC食管癌细胞中NGAL基因的功能   总被引:32,自引:0,他引:32  
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)是脂质运载蛋白(lipocalin)家族的一个新成员 ,可能是人类的一种新的癌基因 ,但是在肿瘤中的功能不清楚。以往研究发现NGAL基因在SHEEC食管癌细胞中显著过表达 ,表明该细胞是一种用来揭示NGAL基因在肿瘤中功能的良好模型。采用反义封闭技术 ,同时结合裸鼠成瘤实验等研究了反义封闭NGAL基因转录对SHEEC食管癌细胞的浸润和分裂增殖等行为的影响。结果发现 ,反义封闭NGAL基因转录不但可以有效地降低SHEEC细胞分泌的基质金属蛋白酶 9和基质金属蛋白酶 2的活性 ,而与此同时裸鼠成瘤细胞的浸润行为也相应地受到了明显抑制 ,然而SHEEC细胞端粒的长度、拓扑异构酶II的含量以及细胞增殖指数等未发生明显变化。表明NGAL基因在食管癌细胞SHEEC中的功能可能主要是通过明胶酶在促进肿瘤细胞的浸润中发挥作用 ,而可能与肿瘤细胞分裂增殖的相关性不明显  相似文献
3.
金顶侧耳多糖PC—4的结构确定与抗肿瘤活性的研究   总被引:13,自引:0,他引:13  
3%氯乙酸浸提过的金顶侧耳子实体中分离纯化另一水溶性多糖PC-4。该多糖分子量经为189kD。纸层析与气相层析分析表明其为单一聚糖。经高磺酸氧化,Smith降解,甲基化,层析,气质联机分析,核磁其振(H-NMR,13C-NMR)谱及红外光谱测定等,可确定C-4的主链结构由β-(1→3)糖苷键相连的葡萄糖构成,部份残基C6,上带有分支。约每5个糖残基有两个侧链,侧链仅为1个葡萄糖残基。  相似文献
4.
为了研究反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架以及肿瘤细胞生物学行为的影响,以不同长度NGAL基因片段反义表达载体和硫代修饰反义寡核苷酸单链片段转染SHEEC食管癌细胞,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭SHEEC食管癌细胞NGAL基因表达的亚细胞克隆.在细胞内F-肌动蛋白(F-actin)及DNA荧光双标记基础上,通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜扫描术等技术手段检测封闭反义NGAL基因表达后, SHEEC食管癌细胞中F-actin和DNA含量、F-actin形态结构以及肿瘤细胞生物学行为的变化特征.结果显示,反义封闭NGAL基因表达后,SHEEC食管癌细胞F-actin的含量明显降低,与永生化食管上皮细胞SHEE相近,但细胞分裂增殖指数未见明显变化.表明反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架有明显影响,而对SHEEC食管癌细胞的分裂增殖影响不明显.激光共聚焦显微镜扫描观测显示,反义封闭NGAL基因表达可使SHEEC食管癌细胞F-actin分布均匀,F-actin小体减少,细胞间连接重新建立,结构较紧密,主要形态结构特征与SHEE细胞趋于一致.提示反义封闭NGAL基因表达可对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架F-actin产生明显影响,推测癌细胞的微丝骨架F-actin可能是NGAL基因在SHEEC食管癌细胞中发挥功能的一种作用环节.  相似文献
5.
NGAL的结构与功能研究进展   总被引:6,自引:0,他引:6  
NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)是一种新的lipocalin,其结构与功能的研究进展为人瞩目,目前认为NGAL具有运输疏水性分子,调节明胶酶B(gelatinaseB或matrix metalloproteinase-9,MMP-9)活性等功能,并可能参与免疫炎症反应以及肿瘤的发生发展,特别是肿瘤的浸润转移等过程,最近,NGAL蛋白的空间结构已被研究清楚,这对于促进NGAL生物学作用或功能的研究。特别是对其新的生物学作用或功能的探索,比如与肿瘤的关系(NGAL可能是一种新的癌基因或促癌基因)将具有十分重要的意义。对此作者进行了综合评述。  相似文献
6.
核基质网架蛋白可能是细胞凋亡中先于DNA的靶   总被引:5,自引:0,他引:5  
1 .前言细胞凋亡是一种由遗传基因编码的主动的细胞死亡方式 ,是由Kerr等[1] 人于 1 972年首先描述的。起初 ,人们所注重的是凋亡细胞形态学方面的改变。研究发现 ,在凋亡中染色质逐渐群集 ,进一步在广泛的区域内凝聚并显示边缘化特征。这些凝聚成分起初是贴近核膜的 ,然后在核的端部形成明显分界的杯状结构 ,并最终形成凋亡小体。长期以来这些特征性变化一直被作为细胞发生凋亡的主要指标。而随后在凋亡细胞中特征性梯形分布DNA片段的发现曾一度使人们认为找到了一种能有效鉴别细胞凋亡的生物化学指标。这也自然而然地导致人们更多…  相似文献
7.
人乳头状瘤病毒诱导食管上皮永生化细胞的双相分化   总被引:4,自引:0,他引:4  
研究中期永生化食管上皮细胞的表型,细胞遗传学和部份基因的改变,以阐明癌前病变的特征,SHEE是该院人人乳头状瘤病毒HPV18E6E7诱导的永生化上皮,传至61代已开始有少量细胞恶性转化。对永生化中期31代细胞用相差显微镜检查细胞形态改变和细胞生长状态(细胞接触和锚定生长);流式细胞仪检测细胞周期;做染色体众数分析;多重PCR检查c-myc,p53,bcl-2和ras等基因。免疫组化检查细胞角蛋白和鬼臼毒素荧光标记检查肌动蛋白F(F-actin)。软琼脂培养的集落细胞接种SCID小鼠检查成瘤性。Western blot方法检测细胞内HPVE6表达蛋白。结果:培养细胞有两种不同分化形态,分化差的基底细胞和分化好的鳞状上皮;前者角蛋白和F-actin极少,后者含量丰富;细胞接触抑制和锚锭生长特性减弱,分析100个细胞染色体众数分二干系,56条(占30%)和61条(占24%)染色体,核型分析属上超二倍体,亚三倍体,多重PCR检查:c-myc,p53基因上调,bcl-2和ras基因阳性。用优选生长在软琼脂上的克隆细胞接种SCID小鼠,未成瘤;HPV18E6表达蛋白阳性。以HPV18E6E7诱导的食管永生化上皮31代细胞形态出现了双向分化,根据其形态表型,双染色体众数的细胞遗传学改变和某些癌基因上调等特性,可以认为SHEE31细胞是外处于癌前改变。  相似文献
8.
食管癌细胞NGAL基因-152~-60区段存在TPA反应元件   总被引:3,自引:1,他引:2  
以往研究发现,在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL)基因过表达,但过表达机制不明.最近研究提示,食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件.为了对NGAL的这一TPA反应元件进行更准确定位,采用PCR法结合嵌套缺失实验从食管癌细胞中克隆了NGAL5′侧翼区-152~ 84、-140~ 84、-78~ 84、-59~ 84、-50~ 84、-41~ 84、-37~ 84、-29~ 84和-10~ 84等片段,并定向插入pGLB、pGLP或pGLE等萤火虫荧光素酶报告基因表达载体中,构建了pGLB-152、pGLP-152、pGLE-152、pGLB-140、pGLB-78、pGLB-59、pGLB-50、pGLB-41、pGLB-37、pGLB-29和pGLB-10等系列报告基因表达载体.将上述报告基因表达载体分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109,并用TPA刺激,检测TPA刺激转染EC109的相对荧光素酶活力,综合判定NGAL-152~ 84区不同长度片段的TPA反应性,对NGAL启动子区的TPA反应元件给予进一步分段定位.结果表明,NGAL启动子区的TPA反应元件位于-152~-60区段,而且应答TPA刺激的反应能力很强.生物信息学分析结果显示,NGAL启动子区所存在的TPA反应元件很可能是一种新结构类型.研究说明,NGAL在DNA序列上有应答TPA刺激的结构基础,将有助于深入到分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL过表达机制,也有助于进一步认识TPA信号细胞内传递途径网络在肿瘤发生发展中的作用.  相似文献
9.
细胞内F-actin的聚合与解聚对肝癌Bel-7402细胞的影响   总被引:2,自引:1,他引:1  
目的:为探讨癌细胞内F—actin的解聚与聚合对癌细胞的形态、迁移、侵入的影响。方法:利用激光共聚焦显微镜对贴附培养的人肝癌:Bel-7402细胞形态及其细胞内F-actin进行观察;使用流式细胞仪对贴附的Bel一7402细胞及其脱落细胞与Cyt—B处理后Bel-7402细胞内F-actin的含量进行分析。结果:Bel-7402细胞在培养的过程中,癌细胞形态伸展,出现侵入性生长,细胞内F-actin聚合形成粗大的贯通细胞内的F-actin束,F-acfin含量增高;癌细胞在生长过程中,常出现重叠生长,细胞变圆,F_actin解聚变短,F-acfin小体增高,细胞有脱落的趋势,其脱落细胞内的F-actin含量低于贴附细胞。结论:人肝癌:Bel-7402细胞内F-actin的聚合可增加癌细胞的贴附和侵入性:细胞内F-actin的解聚,及Gactin重新聚合形成F-aefin小体可影响到癌细胞脱落及迁移。  相似文献
10.
人食管癌cDNA酵母杂交文库的构建与鉴定及其应用   总被引:2,自引:0,他引:2       下载免费PDF全文
以往在研究由促癌物12-o-十四烷酰佛波醇-13-乙酯(12-o-tetradecanoylphorbol-13 -acetate,TPA)诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时,曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)等新的食管癌癌变相关基因.为深入研究这些癌变相关基因在食管癌中以蛋白质-蛋白质或蛋白质-DNA相互作用为基础的功能网络调控关系,建立了一个食管癌cDNA酵母杂交文库.采用Trizol试剂从一种新的人食管癌细胞(SHEEC,由人永生化食管上皮细胞转化而来)中提取细胞总RNA,采用Oligotex mRNA Kit从细胞总RNA中制备PolyA+ mRNA,采用SuperScriptTM Choice System For cDNA Synthesis Kit合成cDNA,以PolyA+ mRNA为探针,化学发光法监测cDNA合成的质量,以pGADT7为载体构建了SHEEC细胞的cDNA酵母杂交文库.文库的滴度为1.19×109 cfu/ml,重组片段大小主要集中在0.5~6.0 kb,重组率为50%.在此基础上,应用酵母单杂交技术手段对该文库中的NF-κB元件结合因子进行了筛选,在SD/-his/-leu/[+15 mmol/L 3-AT]缺陷培养基平板上共获得了约360个单克隆.按照平板上酵母单克隆直径的大小,选择直径大于2 mm者91个,提取质粒进行酶切鉴定和一对一酵母单杂交验证实验,结果获得了30个阳性重组子,并随机取其中的9个阳性重组子进行测序和GenBank/BLAST同源分析,发现某些基因编码的蛋白质产物在关键氨基酸残基位点上与p65和p50的NF-κB元件结合域公共序列具有高度一致性.这些实验结果表明,所构建的人食管癌cDNA酵母杂交文库是成功的.  相似文献
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