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1.
采用溶氧反馈的分批培养流加补料的方法高密度培养重组大肠杆菌BL21(DE3)生产重组葡激酶-水蛭素融合蛋白。通过摇瓶培养对菌种和培养条件的初步筛选,采用溶氧反馈的流加补料策略,进行了5L发酵罐的合成培养基和复合培养基的发酵工艺的研究。通过对培养条件的不断优化,重组葡激酶-水蛭素融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)里得到了高效表达,菌体密度最终达到115g/L(WCW)以上,可溶性重组融合蛋白占菌体总蛋白的30%以上,含量约为1.1~1.2g/L。5L发酵罐的发酵工艺参数在40L发酵罐中进行了放大培养,结果表明该工艺能有效的放大,可适用于工业生产。  相似文献
2.
构建并表达兼有溶栓和抗凝活性、减少出血副作用的人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)和水蛭素(HV2)的融合蛋白。通过提取总RNA和RT-PCR获得t-PA基因,与HV2基因通过活化凝血因子X(Fxa)识别序列(IEGR)的对应碱基序列连接构成融合蛋白基因,融合蛋白基因经pGEM-T、pIC9克隆至表达载体pIC9K上,电转导入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115。转化子摇瓶内甲醇诱导表达。纤维蛋白平板溶圈法和纤维蛋白凝块法分别检测溶栓和抗凝活性。琼脂糖凝胶电泳结果显示克隆的t-PA基因片段大小为1700bp,序列测定结果表明其35位氨基酸由文献报道的精氨酸突变为色氨酸。限制性酶切和PCR鉴定结果均表明融合蛋白基因已克隆入表达载体和宿主菌。甲醇利用实验、G418抗性筛选获得多拷贝甲醇利用快型克隆。甲醇诱导表达产物具有纤溶活性并可被抗t-PA抗体抑制。完整融合蛋白无抗凝活性,但以Fxa裂解后可释放抗凝活性。同时,融合蛋白以单链和双链两种形式存在。融合蛋白在血栓部位特有的Fxa作用下靶向释放抗凝活性,具有溶栓抗凝双功能,有望降低临床出血副作用。  相似文献
3.
基因芯片技术在致病微生物研究中的应用   总被引:2,自引:0,他引:2  
高密度寡核苷酸DNA芯片技术可以通过一次杂交试验获得大量的基因组信息,在基因组结构与基因表达分析中应用最广,在与人类健康有关的遗传病、传染病等许多疾病中具有广泛的应用前景.本文重点对基因芯片技术在细菌、病毒等致病微生物病原鉴定、分类与致病机制研究中的应用作一简要介绍.  相似文献
4.
时间分辨免疫荧光分析测定人血清铁蛋白   总被引:2,自引:0,他引:2       下载免费PDF全文
用一种新型非放射性免疫分析——时间分辨荧光免疫分析法测定人血清铁蛋白含量。方法灵敏度达2ng/ml;测量范围5—1500ng/ml;批内、批间变异系数分别为7.1±0.8%和10.0±1.3%(x±SD);回收率为98.4±7.4%。测定值与RIA法测定值比较,相关性良好。  相似文献
5.
重组中国汉族人源γ-干扰素的纯化和鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
E.coli中高表达的中国汉族人源γ-干扰素是以包涵体的形式存在的,包涵体经各种溶液洗涤后,用8 mol/L尿素裂解,裂解上清在8 mol/L尿素存在下,经离子交换柱层析和凝胶过滤两步纯化,得到纯度大于95%的γ-干扰素,稀释复性后,其比活为5.5×105 U/mg. 激光解析电离质谱分析表明,中国汉族人源γ-干扰素的分子质量为17.32 ku,其N端序列与Gray等报道的γ-干扰素N端序列一致.中国汉族人源γ-干扰素的氨基酸组成分析结果也与其理论值相吻合.  相似文献
6.
小鼠beta-防御素2真核表达载体的构建及表达   总被引:1,自引:1,他引:0  
构建小鼠heta-防御素2(murie beta-defensin 2,mBD2)的真核表达载体pcDNA-mBD2,并观察其在真核细胞中的表达.从小鼠肝组织中提取mRNA通过逆转录聚合酶链反应扩增得到mBD2基因,定向克隆至真核表达栽体pcDNA3.1(+)获得pcDNA-mBD2;经酶切和测序鉴定构建正确,应用脂质体法转染siha细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内mBD2的表达.结果显示,构建了小鼠mBD2的真核表达载体,转染siha细胞培养并采用G418稳定筛选后,获得稳定转染细胞,收集并裂解转染细胞,蛋白免疫印迹法检测到转染细胞内mBD2的表达.成功构建了真核表达裁体pcDNA-mBD2,为研究mBD2在宫颈癌发生发展过程中的作用及作用机制奠定基础.  相似文献
7.
本文报道了血叶啉衍生物(Hpd)及其由高压液相色谱法分离制备的4种主要成分以及血叶啉,血叶啉二盐酸盐和原叶啉(Ⅸ)二钠盐等8种叶啉衍生物分别在水溶液和CHO细胞内的荧光衰变动力学的研究,实验表明,除Hpd分离组分d的荧光寿命略短外,其余7种在水落液里的荧光寺命均在15ns左右,并发现它们的荧光态在细胞内衰变加快,然而,分离组分d在细胞内的荧光寿命却明显加长.根据实验结果,本文对叶啉衍生物的最低激发单线态在细胞内的驰豫过程提出了一种可能的模式,它反映了叶啉衍生物在细胞内与某种细胞组分的结合以及它们之间的能量传递.分析表明,荧光寿命的缩短意味着光敏效率的降低.  相似文献
8.
人扁桃腺淋巴细胞经两次贴壁除去单核-巨噬细胞后,再经连续两次尼龙毛柱处理,得到高度纯化的T和B细胞,在体外用细胞重组实验的方法,比较全面地观察了B淋巴细胞在体外T细胞丝裂原反应中的作用。结果证实,静止的B细胞和经A蛋白菌体试剂活化的B细胞均能非常显著地辅佐T细胞对ConA和PHA刺激的增殖反应,B细胞的这种作用不受HLA的约束。此外还观察了在PHA刺激T细胞产生IL-2反应中B细胞的作用,结果表明,加入B细胞,能明显辅佐T细胞产生IL-2。这些结果证明,B细胞在T细胞丝裂原反应中可作为辅佐细胞,起着与单核-巨噬细胞相似的辅佐作用。  相似文献
9.
移植排斥是生物学中的重大问题,其理论涉及众多生物学科,包括免疫学、生物化学、分子生物学、生理学、细胞生物学、实验血液学等;其实践涉及同种和异种细胞、组织、器官移植,关系到肿瘤、糖尿病、急性放射病、免疫缺陷症、器官衰竭等数以百万计患者的治疗和健康。使用化学材料聚乙二醇、海藻酸钠、壳聚糖、多聚赖氨酸等,发挥化学、物理、生物学科交叉的优势,在移植物细胞表面进行物理化学反应,修饰和改造细胞表面抗原分子,有望为克服移植排斥反应开辟新的途径。  相似文献
10.
 表达重组人白细胞介素-9(recombinanthumaninterleukin-9rhIL-9)的大肠杆菌经破碎、包涵体洗涤、裂解提取、凝胶过滤和离子交换色谱分离,得到了电泳纯的rhIL-9,回收率66%,分子量与理论值相符,有刺激小鼠骨髓巨核系集落生成的活性.为rhIL-9的大规模制备及更深入的研究奠定了基础  相似文献
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