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1.
固定化青霉素酰化酶的研究   总被引:11,自引:4,他引:7       下载免费PDF全文
将巨大芽孢杆菌胞外青霉素酰化酶通过共价键连接到醋酸纤维素载体上,制成的固定化青霉素酰化酶的表观活力达2000 u/g左右(PDAB法)。水解lO%(w/v)的青霉素G钾盐落液,使用30批,保留活力70%以上。6-氨基青毒烷酸(6-APA)总收率平均达88.37%。固定化青霉素酰化酶水解青霉素G的最适pH为9.95,最适温度为55℃,表观米氏常数为1.093×10-2mol/L,在pH 5.8-10.7,温度45℃以下酶的活力稳定。  相似文献
2.
β—内酰胺系列抗菌素抗菌谱广、疗效高、毒副作用小,国际上研究与应用日渐广泛深入。头孢氨苄(Cephalexin)是重要的半合成抗菌素之一,由头孢霉素母核7—氨基脱乙酰氧基头孢烷酸(简称7-ADCA)和侧链结构物苯甘氨酸或其甲酯(PGME)经酰化而生成。酰化有化学法和酶法两种。采用青霉素G酰化酶或a—氨基酸酯酶或,a—氨酰转移酶的酶法,具有工艺操作简单、无需基团保护、环境污染轻等优点。继日本人于70年代初试验成功酶法之后,80年代初我们开展了这方面研究。制备方面,胞外酶优于胞内酶;使用方面,固定化酶优于固定化细胞。在用具有青霉素G酰化酶活性的固定化大肠杆菌(Escherichia coli)细胞合成头孢氨苄的基础上,又研究了用固定化巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)BP931胞外青霉素G酰化酶酰化合成头孢氨苄的条件。本文报道这一研究结果。  相似文献
3.
胞外青霉素酰化酶产生菌的选育   总被引:6,自引:6,他引:0       下载免费PDF全文
利用纸片显色方法,从土壤甲诀速筛选出98株产胞外青霉素酰化酶的菌种,经复筛其中10株酶活力较高,经鉴定均属于巨大芽孢杆菌。经单株分离得46号菌,用这株菌进行了产酶条件的研究,在最适产酶条件下,酶话力比开始提高了3.6倍。在此基础上又进行了物理化学因素处理,得突变株UL-81,酶活力达720u/1 Ooml发酵液。对原株和突变株进行比较,发现UL-81菌落、细胞形态、诱导剂苯乙酸用量及添加时间等明显不同于原株。在500L罐发酵酶活达8 20u/1OOml发酵液,为开始酶活的16倍。  相似文献
4.
以酸部分水解聚丙烯腈纤维为载体 ,以戊二醛为交联剂 ,共价键结合制备了固定化胞外青霉素G酰化酶。当水解后的载体中 NH2 基含量为 690 μmol g和含水量为 64%时 ,对酶蛋白的固定量达 1 0 0mg g以上 ,固定化酶的活力达 2 30 0IU g ,酶活力总产率为 30 % ,固定化效率为 56%。酶活力的总产率和固定化率随加酶量的增加而降低。该酶可以将浓度为 2 5%~1 2 5%的青霉素G钾盐水解 98%以上。批投青霉素G钾盐为 1 0g,酶负荷为 1 50IU g(PGK) ,经2 0批水解反应后 ,剩余酶活力为 80 %。用二硫基苏醣醇处理固定化酶 ,对水解青霉素G钾盐的操作稳定性有促进作用。固定化酶的室温保存半衰期为 1 30d。用戊二醛和硼氢化钠溶液处理固定化酶后 ,酶活力的室温保存稳定性有所降低。  相似文献
5.
固定化细胞生产7-氨基脱乙酰氧基头孢烷酸   总被引:4,自引:3,他引:1       下载免费PDF全文
为了用重排酸制备7-氨基脱乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA),我们从20株具有青霉素酰化酶活性的大肠杆菌中筛选裂解重排酸的菌株,发现凡能裂解青霉素G的菌株都能裂解重排酪,其中 Asl.76菌胜酶活力高。  相似文献
6.
为筛选较优的产青霉素酰化酶的菌种,我们从9个属的232株纽菌中选出了19株产青霉素酰化酶的大肠杆菌,其中,AS 1.76和E 110为最好。还对大肠杆菌AS 1.76的产酶条件进行了研究。结果表明,最适的培养基成分是(%):蛋白胨l,苯乙酸0.2,玉米浆0.3,氯化钠0.5;在250毫升的三角瓶中装30毫升培养基时,通气量正合适:培养基的初始pH以7.0为佳;培养时间15小时。在未加玉米浆的培养基中,少量的Fe2+(5馓克/毫升)对酶形成有刺激作用,过量的Fe2+(大于10教克/毫升)是不利的;在培养基中添加0.3%的玉米浆能降低Fe2+对酶形成毒害作用。  相似文献
7.
聚丙烯腈纤维固定化青霉素酰化酶性质的研究   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
将巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)青霉素酞化酶连接到聚丙烯腈纤维载体上,制成固定化青霉素酰化酶。其表现活力约为2000u/g。水解青霉素G的最适温度为50℃;最适PH为9.0;在PHS.5~10.3、温度50℃以下酶的活力稳定;表观米氏常数Ka为1.33×10-8mol/L;最大反应速度Vm为2.564mmol·min-1;苯乙酸为竞争性抑制剂,抑制常数为0.16mol/L。水解10%的青霉素G钾盐溶液,使用20批,保留酶活力80%。  相似文献
8.
用聚丙烯腈纤维固定化青霉素酰化酶水解头孢菌素G制备7-ADCA,固定化酶对头孢菌素G的最适pH为9.0,最适温度50℃。在37℃、pH8.0固定化酶对头孢菌素G的表观米氏常数为1.67×10~(-2)mol/L。最大反应速度为3.01mmol·g~(-1)·min~(-1)。头孢菌素G溶液浓度在2%以上时,对固定化酶有明显的抑制作用。固定化酶水解头孢菌素G的最佳投料浓度为5%~6%,水解时用酶量以每克头孢菌素G投300U以上为好。按上述条件水解头孢菌素G,操作25批后固定化酶保留活力77.8%,7-ADCA平均收率92.68%。  相似文献
9.
巨大芽孢杆菌BP931胞外青霉素G酰化酶的产生条件   总被引:3,自引:2,他引:1       下载免费PDF全文
研究了巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)BP 931胞外青霉素G酰化酶的产生条件。菌在由葡萄糖0.7%,氮源1号0.5%,酵母膏1.0%和苯乙酸0.8%组成的液体培养基(灭菌前pH9.0,灭菌后pH8.0)中,28℃振荡培养44h。以6-硝基-3-苯乙酰胺基苯甲酸为底物,培养滤液酶活力为9.0IU/ml。诱导物苯乙酸于培养6h后加入,酶活力可以提高到11.0IU/ml。Ca2+、Al3+、Sn3+、Mn2+和Fe2+离子降低酶的形成;Cu+和C02+离子显著抑制菌生长,降低酶的形成;Zn2+,Cd2+和Hg2+离子完全抑制菌生长和酶形成。  相似文献
10.
固定化大肠杆菌AS1.76细胞酶促合成头孢立新的研究   总被引:3,自引:2,他引:1       下载免费PDF全文
本文报道固定化大肠杆菌(E.coli)AS1.76细胞酶促合成.的研究结果。用2%7一ADcA,4%。PGME,在pH6.0,10℃一15℃进行反应,头孢立新的合成率达到82%。在上述条件下,用固定化细胞柱制备头孢立新,每次投7-ADGA log,PGME 20g,平均得头孢立新12g,收率为70.6%。  相似文献
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