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1.
人B组轮状病毒vp7基因的克隆和序列分析   总被引:8,自引:0,他引:8  
利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,扩增了人B组轮状病毒WH-2vp7基因,连接到克隆载体pUCm-T,并对其基因序列进行了分析.WH-2与ADRV的同源性达98%,与印度加尔各达分离株CAL-1达92%,而与动物B组轮状病毒同源性差别较大,如与IDIR(鼠)同源性仅为58%,与WD653(牛)B组轮状病毒同源性为63%,与ATI(牛)同源性为61%.对vp7基因的二级结构分析发现其mRNA折叠形成多达18个发卡环状结构.VP7蛋白是249个氨基酸组成,分子量为28.4kDa,含有3个潜在的N连接的糖基化位点和多个磷酰化位点,从氨基酸序列的同源性来看,WH-2与ADRV的同源性达99%,与CAL-1达95%,而IDIR仅为51%,说明了WH-2和ADRV的起源相同.此研究对了解B组轮状病毒基因的进化和变异规律具有重要意义,也将为B组轮状病毒预防性疫苗的研制提供科学的依据.  相似文献
2.
日本花椒的组织培养   总被引:4,自引:0,他引:4  
1植物名称日本花椒(Zanthoxylumjaponica)。2材料类别嫩茎段。3培养条件培养基:(1)分化培养基:MS+BA0.5mg/L(单位下同)+IBA0.1;(2)成苗培养基:Ms+BA0.2+GAo5十三BAof;(3)生根培养基:回/2MS+IAA0.2+IBA0.l。培养温度24~26C,光照度2000~2500lx,每日光照14h。毛生长与分化情况()将消毒后的带l~2胶芽的嫩茎段接种到分化培养基上,约1个月能长出5~8个3cm左右高的丛生芽。把小芽单个切开接种到成苗培养基上,生长三周后长到5cm高以后,从上部3cm处切下供生根,将下部带芽的茎段接种到新的分化培…  相似文献
3.
一步法双重RT-PCR检测SARS冠状病毒技术研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
参照WHO公布的PCR检测SARS相关冠状病毒的引物序列,我们合成了4对引物,建立了一步法RT-PCR检测SARS相关冠状病毒的方法.利用该方法,对武汉市非典型肺炎疑似病例喉漱液进行了SARS相关冠状病毒检测,其中w20用4对引物检测均在相应的位置出现了DNA条带,W1只有BNIin-s/as引物出现预期产物.同时我们将样品W20的RT-PCR扩增产物进行了序列测定,结果显示该片段序列与其他地区和国家分离的SARS冠状病毒基因高度同源性,这进一步说明RT-PCR扩增的产物是SARS冠状病毒基因片段.在此基础上我们又建立了四种SARS冠状病毒一步法双重RT-PCR检测方法,在一个RT-PCR反应中用两套引物同时对SARS冠状病毒基因两个不同的片段进行检测,检测结果具有更高的特异性.  相似文献
4.
雪莲对正常及辐射损伤小鼠巨噬细胞功能的影响   总被引:2,自引:0,他引:2  
本文研究了50%雪莲水煎剂对正常及5GY60Co一次性全身照射BALB/C小鼠巨噬细胞功能的影响,结果表明:口服50%雪莲水煎剂能增强巨噬细胞吞噬鸡血球及分泌肿瘤坏死因子(TNF)的能力,与相应对照组比较具有显著性差异,提示中药雪莲具有扶正固本提高机体防御机能及促进辐射损伤修复的作用。为该药的临床应用提供了科学依据。  相似文献
5.
SARS病毒N蛋白、E蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定   总被引:2,自引:0,他引:2  
本研究通过RT-PCR反应获得了SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N)和膜蛋白(E)基因,将n基因和e基因克隆到大肠杆菌表达载体pGEX KG上,并在大肠杆菌中以可溶形式获得高效表达,表达产物经亲和层析纯化.重组蛋白N与SARS病毒抗体呈现特异性的反应,为进一步研究SARS病毒感染免疫应答机制和早期诊断奠定基础  相似文献
6.
本研究通过RT-PCR反应获得了SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N)和膜蛋白(E)基因,将n基因和e基因克 隆到大肠杆菌表达载体pGEX-KG上,并在大肠杆菌中以可溶形式获得高效表达,表达产物经亲和层析纯化。重 组蛋白N与SARS病毒抗体呈现特异性的反应,为进一步研究SARS病毒感染免疫应答机制和早期诊断奠定基础  相似文献
7.
利用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)技术,扩增了人B组轮状病毒WH—2vp7基因,连接到克隆载体pUCm—T,并对其基因序列进行了分析。WH—2与ADRV的同源性达98%,与印度加尔各达分离株CAL—1达92%,而与动物B组轮状病毒同源性差别较大,如与IDIR(鼠)同源性仅为58%,与WD653(牛)B组轮状病毒同源性为63%,与ATI(牛)同源性为61%。对vp7基因的二级结构分析发现其mRNA折叠形成多达18个发卡环状结构。VP7蛋白是249个氨基酸组成,分子:量为28.4kDa,含有3个潜在的N连接的糖基化位点和多个磷酰化位点,从氨基酸序列的同源性来看,WH—2与ADRV的同源性达99%,与CAL—1达95%,而IDIR仅为51%,说明了WH—2和ADRV的起源相同。此研究对了解B组轮状病毒基因的进化和变异规律具有重要意义,也将为B组轮状病毒预防性疫苗的研制提供科学的依据。  相似文献
8.
趋化因子受体如CCR5和CXCR4是HIV侵入细胞的辅助受体,趋化因子与其受体的结合可以抑制HIV感染细胞。近年来在疱疹病毒8(Human herpesvirus8,HHV8)基因组中发现与人趋化因子有较高同源性的开放阅读框,分别命名为vMIP1、vMIP2和vMIP3。研究发现vMIP2与多种人趋化因子受体有高亲和力。本研究在大肠杆菌中表达出融合蛋白TrxA—vMIP2,用亲和层析的方法对其纯化。纯化产物用肠激酶酶切后,经离子交换层析纯化出目的蛋白vMIP2。体外活性研究表明纯化的vMIP2可以有效地抑制R5和X4 HIV—1在人外周血单核细胞上的复制。  相似文献
9.
参照WHO公布的PCR检测SARS相关冠状病毒的引物序列,我们合成了4对引物,建立了一步法RT-PCR检测SARS相关冠状病毒的方法。利用该方法,对武汉市非典型肺炎疑似病例喉澈液进行了SARS相关冠状病毒检测,其中w20用4对引物检测均在相应的位置出现了DNA条带,W1只有BNIin-s/as引物出现预期产物。同时我们将样品W20的RT-PCR扩增产物进行了序列测定,结果显示该片段序列与其他地区和国家分离的SARS冠状病毒基因高度同源性,这进一步说明RT-PCR扩增的产物是SARS冠状病毒基因片段。在此基础上我们又建立了四种SARS冠状病毒一步法双重RT-PCR检测方法,在一个RT-PCR反应中用两套引物同时对SARS冠状病毒基因两个不同的片段进行检测,检测结果具有更高的特异性。  相似文献
10.
目的:探讨HBVX区基因用于乙型病毒性肝炎早期诊断价值和意义。方法:设计特异性引物,将pBR322-HBV质粒X区部分序列PCR产物AT亚克隆至pBS—T载体,提取和纯化质粒DNA,再对HBVX区序列进行PCR扩增。结果:获得了预期希望的质粒。PCR的最佳退火温度为51℃,灵敏度达到101拷贝/2μl,线性范围101—1010拷贝/2μl。讨论:pBR322-HBV质粒中的靶基因成功地被亚克隆至pBS—T载体。pBR322-HBV中X区目的序列扩增产物为57bp,该小片段勿需纯化就可直接AT亚克隆至新载体,有利于后续的常规PCR检测和TaqMan MGB荧光定量PCR检测。  相似文献
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