小尾寒羊微卫星与RAPD标记的研究

小尾寒羊是世界上具有非季节性发情和多胎特性的高繁殖率绵羊品种之一。选择4个位于绵羊6号染色体上且与FecB基因紧密连锁的微卫星标记，对小尾寒羊基因组进行PCR扩增后，采用最小二乘法估计各等位基因片段对产羔数的影响。分析结果表明，等位基因OarJIA-5、OarJIA-10、BM143-12和OarHH55-11可以作为小尾寒羊多胎位点的分子标记。从100条随机引物中筛选出18条引物，对小尾寒羊、大尾寒羊、洼地绵羊、滩羊等4个绵羊品种和鲁北山羊的基因组进行扩增，共扩增出146条带，其中94条表现出多态性，占64．60%，同时扩增出每个品种的特异性条带。采用Nei氏标准距离和NJ聚类分析对不同品种的遗传关系进行分析，结果表明，4个绵羊品种亲缘关系很近，提示它们可能起源于共同的原始祖先。  

猪FSH β亚基基因结构区Alu序列插入突变的研究

通过聚合酶链式反应（PCR）对中国华北型优良地方猪种莱芜猪及杜里猪，长白猪的卵泡刺激素（FSH）β亚基基因结构区插入片段进行扩增，并对0．5kb扩增产物进行克隆和测序，序列分析表明，在已发表的猪FSHβ亚基基因全序列的＋809和＋810碱基之间，莱芜猪，杜里猪和长白猪分别存在一个长度为275，277和274bp的插入片段，插入片段末端的poly(A)分别为17，19和16个腺苷酸，均显著短于高产猪种太湖猪（292bp和32个腺苷酸），对FSHβ亚基基因插入片段进行BamHI多态性分析，发现本研究所检测样品中不存在BamHI 多态性，插入片段中存在一个RNA聚合酶Ⅲ启动子及AluI内切酶识别位点，所以该睡段可能为Alu成分，因RNA聚合酶Ⅲ这种有功能的内部启动子能够转录相邻的染色体序列，该插入片段可能影响FSHβ亚基基因或其他基因的表达调控，把FSHβ亚基基因作为控制猪产仔数主效基因的候选基因与产仔数进行连锁分析，证明FSHβ基因因座在莱芜猪种中与控制猪产仔数的主效基因紧密连锁，优质基因AA纯合子比BB纯合子母猪平均每胎产仔1．2头，因不同品种猪插入序列的主要差异是末端的poly(A)长短不同，推测该插入片段末端的pol(A)结构亦可能影响猪的产仔数。  

Mx基因稀有密码子和mRNA结构及大肠杆菌表达 优化

通过对稀有密码子和mRNA翻译起始区二级结构的分析, 构建了4种重组表达菌株BL21(DE3)/pET-Mx, Rosseta(DE3)/pET-Mx, BL21(DE3)/pGEX-Mx和Rosseta(DE3)/pGEX-Mx, 在大肠杆菌中进行Mx基因的表达, Rosseta(DE3)/pET-Mx和Rosseta(DE3)/pGEX-Mx重组表达菌中都获得了表达, Western blotting检测到了特异的75 kDa表达产物。实验结果证明稀有密码子和mRNA翻译起始区二级结构对Mx 蛋白表达都有影响, 选择适用于稀有密码子表达的菌株Rosetta(DE3)有利于Mx蛋白的表达, 同时翻译起始区二级结构能值较低的表达载体pGEX-Mx获得的表达量明显增高。实验中首次获得了重组表达鸡全长Mx蛋白的大肠杆菌重组菌。  

鸡Ⅹ期胚盘细胞体外培养

为证实经遗传修饰的鸡X期胚盘细胞具有参与受体胚胎发育和形成嵌合体的能力 ,本研究将由鸡X期胚盘制成的细胞悬液与经脂质体包埋的抗鸡传染性支气管炎病毒基因重组质粒PGS1共孵育后 ,直接显微注入同期受体胚盘 (14 0枚 ) ;或对转染后供体细胞进行G418抗性筛选后显微注入同期受体鸡胚盘 (14 0枚 ) ;或将供体细胞体外培养 4 8h ,再与脂质体 PGS1复合物共孵育后显微注入同期受体鸡胚盘 (190枚 ) ,制备转基因嵌合体鸡 ,并应用PCR和RAPD方法 ,对鸡胚和雏鸡不同组织或血液中的DNA进行检测。结果表明 :直接注射组孵化率(5 7% )显著 (P <0 0 1)高于G418筛选处理组 (1 4 % )和培养 4 8h处理组 (2 1% ) ;G418筛选处理组不同胚龄鸡胚组织、器官中外源DNA的PCR检测阳性率均高于其它二个组。实验结果证明 ,体外培养 4 8h并经遗传修饰的胚盘细胞仍然具有形成嵌合体的能力 ,利用早期胚盘细胞途径制备转基因鸡是可行的。  

猪雌激素受体基因Pvu II多态性与产仔数性状的关系 Relationship between Pvu II Polymorphisms at Estrogen Receptor Gene and Litter Size in Swine

雌激素受体（estrogen receptor，ESR）能调控雌激素的合成，影响繁殖功能。将ESR基因作为控制猪产仔数的候选基因，分析其Pvu II多态性与高产猪种莱芜猪和国外引进猪种长白猪产仔数的关系。序列分析发现，PCR扩增区56bp的Pvu II酶切片段位于RFLP分析获得的37kb正向序列的起始部分。因ESR基因在高产仔数的莱芜猪中的Pvu II多态性分布不能证实B基因为优势基因，故推测37kb条带对该猪种产仔数可能不起决定作用。 Abstract:Estrogen receptor (ESR) can regulate the synthesis of oestrogen and affect the reproduction of swine.The relationship between PvuII polymorphisms at estrogen receptor gene and litter size was analyzed in Laiwu breed and Landrace breed by candidate gene method.The results were shown that 56bp of PvuII polymorphisms was the same as the beginning sequence of 37kb of RFLP.The distribution of PvuII polymorphisms also could not prove that B gene was a superior gene,and there was no decisive effect of 37kb band on litter size in pigs.  

畜禽遗传资源系统保存的理论与模拟实验研究

赤拟谷盗和计算机模拟实验结果，验证了畜禽遗传资源系统保存理论的可行性、合理性，及其数学模型的生物学意义。同时它还表明，系统保存群体应保持一定大小的群体有效含量，控制群体间的基因流动，并根据保存基因（或性状）的群体遗传特征，适宜的选择方法和交配制度。  

猪肌肉生长抑制素基因5′调控区T→A突变与生长性状的关系分析

生长速度是猪育种中选择的主要目标性状之一,鉴定影响生长速度的QTL或基因具有重要的实践意义和理论价值.对猪肌肉生长抑制素基因(myostatin,MSTN)5′调控区TA突变与生长性状的关系进行了分析.突变所产生的基因型的判定采用PCR-RFLP方法进行.猪生长性状的测定指标包括60日龄体重(body weight at 60d,BW60)、前期平均日增重(average daily gain of stage one,ADG1)、后期平均日增重(average daily gain of stage two,ADG2)和全期平均日增重(average daily gain of whole stage,ADG),所采用的记录数分别来自165,276,275和275头无亲缘关系个体.采用SAS软件包的GLM程序对MSTN基因型与猪生长性状的关系进行分析.结果表明,MSTN基因型对猪BW60,ADG1和ADG2的效应不显著(P＞0.1),对ADG2的效应在剔除基因型与品种的互作效应以后几乎达到显著水平(P＝0.0522),突变等位基因的携带者(基因型为TA)具有较高的后期平均日增重.  

正交法整体优化差异显示反应体系

mRNA 差异显示PCR( mRNA differential display PCR，DDRT-PCR)是分离差异表达基因的有效方法，但该方法的准确性极易受到外部因素和内部因素的影响。本研究采用正交法优化DDRT-PCR反应条件，充分考虑到模板浓度、锚定引物浓度、随机引物浓度、dNTPs浓度、镁离子浓度以及Taq酶用量等因素在差异显示反应过程中的交互作用，一次PCR反应即可确定最佳反应组合。将筛选出的条件用于DDRT-PCR，得到差显结果假阳性率低，重复性和稳定性好，而且简化了反应条件的优选程序，这表明正交法是优化差异显示反应条件的理想方法。为了进一步简化整个差异显示反应系统的操作程序，降低假阳性率，研究采用了非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE)和银染显示差异带的方法，并用反向Northern法来验证回收条带，从而更加优化了差异显示反应体系。  

鸡X期胚盘细胞体外培养

为证实经遗传修饰的鸡X期胚盘细胞具有参与受体胚胎发育和形成嵌合体的能力，本研究将由鸡X期胚盘制成的细胞悬液与经脂质体包埋的抗鸡传染性支气管炎病毒基因重组质粒PGS1共孵育后，直接显微注入同期受体胚盘（140枚）；或对转染后供体细胞进行G418抗性筛选性后显微注入同期受体鸡胚盘（140枚）；或将供体细胞体外培养48h，再与脂质体-P^GSI复合物共孵育后显微注入同期受体鸡胚盘（190枚），制备转基因嵌合体鸡，并应用PCR和RAPD方法，对鸡胚和雏鸡不同组织或血液中的DNA进行检测。结果表明：直接注射组孵化率（5.7%)显著（P＜0.01)高于G418筛选处理组（1.4%)和培养48h处理组（2.1%)；G418筛选处理组不同胚龄鸡胚组织、器官中外源DNA的PCR检测阳性率均高于其它二个组。实验结果证明，体外培养48h并经遗传修饰的胚盘细胞仍然具有形成嵌合体的能力，利用早期胚盘细胞途径制备转基因鸡是可行的。  

饲养层及细胞因子对胚胎干细胞的影响

不同动物胚胎干细胞的生长条件不同，因此筛选合适的饲养层细胞建立适宜的培养体系是胚胎干细胞培养中的关键环节。本文就不同的饲养层细胞及各种外源细胞因子的作用做了简要论述。