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1.
牛乳腺上皮细胞的分离培养及其生物学特性   总被引:24,自引:0,他引:24       下载免费PDF全文
采用胶原酶消化法和胰蛋白酶选择性消化法分离、培养和纯化牛乳腺上皮细胞。形态学观察表明,培养的细胞具有典型的上皮细胞形态特征;染色体分析结果表明,培养的细胞具有正常的染色体数目。通过荧光免疫细胞染色方法鉴定了培养的细胞表达上皮细胞特异的角蛋白5和8。该细胞在添加胰岛素、氢化可的松以及羊催乳素的无血清培养液中诱导培养时,用RT-PCR方法检测到了β-酪蛋白基因的转录。这些结果表明,分离培养的细胞是乳腺上皮细胞,这些细胞在诱导培养的条件下能够转录表达β-酪蛋白。  相似文献
2.
李扬  吴凯峰  郭旭东  郭继彤  旭日干 《遗传》2002,24(6):653-655
通过脂质体(FuGENE-6)介导,将真核表达载体pEGFP-C1成功导入体外培养的牛胎儿成纤维细胞,探讨影响外源基因转染效率的参数,如DNA和脂质体的用量、转染的细胞数量以及细胞暴露于DNA与脂质体复合物的时间长度。通过实验发现,绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的表达随DNA、脂质体量的增加而增加,延长细胞暴露时间反而使转染效率下降,转染细胞数适当才能得到较高的转化率。 Optimization of Parameters of Exogene Transfection of Bovine Fetal Fibroblasts in vitro Mediated by Liposome LI Yang,WU Kai-feng,GUO Xu-dong,GUO Ji-tong,BOU Shor-gan The Research Center for Laboratory Animal Science of Inner Mongolia University,The Key Laboratory of Ministry of Education of China for Mammal Reproduction Biology and Biotechnology,Huhhot 010021,China Abstract:pEGFP-C1 eucaryon expression vector was successfully transfected by liposome into bovine fetal fibroblasts.We investigated the effect of parameter such as the dose of DNA and liposome,number of cell transfected and exposure time of the cell to the DNA-liposome complexes.It was indicated that GFP(green fluorescent protein)expression was enhanced as the dose of DNA and liposome increased and on decline as the exposure time was prolonged.The improvement of transfection efficiency depent on the suitable cell number. Key words:liposome; GFP; bovine fetal fibroblasts; transfection  相似文献
3.
牛胎儿成纤维细胞的分离与体外培养   总被引:11,自引:0,他引:11  
分别用胶原酶Ⅲ和胰蛋白酶成功地分离了牛胎儿成纤维细胞,并对其进行了体外培养,同时探讨了两种酶消化分离牛胎儿组织的时间对牛胎儿成纤维细胞原代培养的影响。用组织块直接培养也成功得到了牛胎儿成纤维细胞,并探讨了不同组织块大小对牛胎儿成纤维细胞原代培养的影响。通过绘制生长曲线,可以研究牛胎儿成纤维细胞增殖规律;通过制备牛胎儿成纤维细胞的细胞染色体发现,经过传代(12代)、冷冻保存、解冻,牛胎儿成纤维细胞染色体数目不变。  相似文献
4.
牛冷冻试管胚胎性别鉴定的应用   总被引:10,自引:1,他引:9       下载免费PDF全文
利用双引物PCR技术对优质良种牛体外受精的冷冻胚胎进行性别鉴定。并对分割后的半胚分别进行PCR扩增和染色体分析,两种方法的判定结果相吻合,在本实验条件下,利用减少PCR体系中细胞的数量来确定最低的模板DNA的检出量,2-细胞不能检测,4-细胞检出率为62.5%,8-细胞为90%,16-细胞以上为100%。对23牧经过性别鉴定后的胚胎进行移植,获得5头纯种试管牛,产犊率为21.7%,与正常的胚胎移植 结果27.3%(3/11)无显著差异,预测性比为100%符合。  相似文献
5.
不同培养基对牛体外受精胚发育率及抗冻性的影响   总被引:6,自引:0,他引:6  
采用M199、SOFaa(aa:Amino Acid)和SOF对牛体外受精卵进行发育培养,比较了三种培养条件下的囊胚发育率、孵化率以及这三种条件下培养出来的囊胚的抗冻能力。在M199和SOFaa处理组,囊胚发育率分别为22.6%和29.0%,孵化率分别为 11.3%和8.1%,两者间无显著差异,但均极显著高于SOF处理组(13.6%,0,P<0.01)。三个处理组的囊胚经冷冻解冻后的存活率分别为78.5%、46.4%和17.3%,孵化率分别为41.9%、23.2%和0,三者间存在极显著差异(P < 0.01)。结果表明,不同的培养液不但影响胚胎发育率,同时也影响胚胎的抗冻能力,M199的培养效果优于SOF,氨基酸能明显提高胚胎发育率及抗冻能力。  相似文献
6.
通过体外受精技术缩短绒山羊育种周期的研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
本研究以羔羊卵巢母细胞为材料,把体外受精技术应用到绒山羊育种工作中,观察了羔羊体外受精卵的体外发育及移植产羔的效果,以便探讨通过体外受精技术缩短绒山羊育种周期的技术途径。对406 枚羔羊体外受精卵用M199 hcG、M199 LH 和M199 hcG EGF三种培养基进行体外发育培养。结果是,2~4 细胞期胚的发育率平均分别为40-0 % 、43-6 % 和49-6 % ;桑椹胚和囊胚的发育率平均分别为17-5 % 、15-8 % 和18-8 % 。将49 枚F1 代羔羊2~8 细胞期胚移植给31 只受体母羊,结果有11 只妊娠(35-5 % ) 并产羔12 只(F2 代) ;将24 枚F2 代羔羊2~4 细胞期胚移植给15 只受体母羊,结果有2 只妊娠(13-3 % ) 并产F3 代羔羊2 只。  相似文献
7.
昆明小鼠卵子的体外受精及发育的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
为建立稳定有效的昆明小鼠卵子的体外受精和体外培养系统,研究中以成熟雄鼠附睾尾部精子与超排得到的卵子在TYH培养液中进行体外受精,并对精子的穿入情况以及受精卵中精子头部及卵细胞核的形态变化进行了连续观察。将小鼠输卵管上皮或卵丘细胞加至培养液中与受精卵共同培养,克服了“2细胞阻滞”现象,分别有72.3%和69.9%的胚胎发育为桑椹胚。将培养得到的桑椹胚和囊胚移植给受体雌鼠后,得到了产仔的结果。证明本研究建立的昆明小鼠卵子的体外受精和培养系统是可行的。  相似文献
8.
昆明小鼠卵子的体外受精及发育研究   总被引:2,自引:1,他引:1  
9.
小鼠嵌合体制作技术的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
本研究采用人工聚合技术,将小鼠不同品系和同品系之间的8细胞胚聚合为一体,分别用PBS FCS、BWW和BMOC-Ⅲ培养20—24小时后观察了发育率。其结果在昆明白←→C57中分别有88.1%(59/67)、95.0%(115/121)和94.8%(73/77),在昆明白←→昆明白中分别有93.3%(28/30)、87.7%(121/138)和86.7%(52/60)的嵌合胚发育为桑椹胚或胚泡,各处理组之间无显著差异。将141枚嵌合胚分别移植给12只受体,结果有7只小鼠妊娠共产仔25只。在昆明白←→C57的17只嵌合体小鼠中毛色为黑、白和杂色的各有3、4和10只。  相似文献
10.
提高牛体外受精核移植胚胎发育率的研究   总被引:2,自引:0,他引:2       下载免费PDF全文
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