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1.
一种动物基因组DNA提取方法的改进   总被引:64,自引:2,他引:62       下载免费PDF全文
介绍一种动物基因组DNA提取方法。该方法具有简便、快速、实用的特点,所获得的DNA数量和质量都很高,可用于各种分子生物学实验。  相似文献
2.
RAPD技术的标准化问题   总被引:36,自引:2,他引:34       下载免费PDF全文
1985年PCR技术的出现[1],是分子生物学方法学上一次里程碑性质的革命,极大地推进了分子生物学所涉及的多学科的发展,给生命科学带来了巨大的变革.伴随着该技术的出现,与之相结合的一批新技术相继出现,RAPD(random amplified polymorphic DNA,随机扩增多态性DNA) 就是其中较引人注目的一项技术.  相似文献
3.
福尔马林保存的动物标本基因组DNA的提取方法   总被引:25,自引:0,他引:25  
从在福尔马林长期保存的动物标本中提取基因组DNA用于分子生物学研究一直是一个未得到彻底解决的难题。本文提出了一种从浸泡在福尔马林的大仓鼠肝脏和日本鳗鲡肌肉标本中提取基因组DNA的新方法。取浸泡于福尔马林中的大仓鼠肝脏或日本鳗2鲡肌肉适量,用PBS溶液冲洗,放在灭菌的吸水纸上将其揩干,于超净工作台内用无菌剪刀将材料剪成50mg的小块,放入PBS液浸泡12-24h;然后转入70%的乙醇中处理12-24h。依次换入下列梯度酒精中处理:80%乙醇,2h,重复一次;90%乙醇,2h,重复一次;95%乙醇,2h,重复一次;100%乙醇,1h,重复一次。然后将材料放入1/2倍的PBS液中浸泡12h。其间更换一次溶液。提取方法参考Sambroock等人(1989),加蛋白K瓣量按标准量(100μg/mlL),在50-56℃温浴3-6h处理过程中,不断轻摇混匀,视消化效果可以重复加入标准量的1/2倍蛋白酶K进行消化,直至将材料完全消化为止;酚氯仿抽提最后一次的上清液移入透析袋中透析;沉淀DNA时,在-20℃下20min效果为宜。该方法主要特点在于对标本进行预处理,在保证不使DNA进一步了解的前提下,首先去除标本中所含的福尔马林溶液的成分,然后利用改进的酚氯仿抽提法提取该类标本的基因组DNA,再进一步用透析法纯化DNA。研究结果表明,采用该方法提取和纯化被试标本基因组DNA能较好地应用于RAPD,微卫星位点的PCR扩增、Suthern和斑点杂交。  相似文献
4.
猪IGF2基因的遗传多态性及其遗传效应分析   总被引:7,自引:0,他引:7       下载免费PDF全文
薛慧良  徐来祥 《遗传》2008,30(2):179-184
采用PCR-SSCP方法检测胰岛素样生长因子2 (insulin-like growth factor 2, IGF2)基因外显子7, 8, 9的多态性, 并分析其对初生重、断奶重、6月龄重和6月龄背膘厚的遗传效应。根据猪IGF2基因的DNA序列(AY044828)设计3对引物, 结果在Ex8引物对扩增的片段上发现了多态性, 并对纯合子进行测序, 发现exon8的53位存在C→T转换, 且检测到3种基因型(AA、AB、BB)。统计结果表明, 3种基因型在各品种中的分布不一致, 长白猪与大白猪比较, 莱芜猪与大薄莲猪比较, 沂蒙黑猪和里岔黑猪比较差异不显著(P > 0.05); 其他猪种间基因型分布的差异均显著(P < 0.01)。固定效应模型分析结果表明, 初生重和6月龄背膘厚基因型间差异显著(P < 0.05), 而断奶重和6月龄重基因型间差异不显著(P > 0.05)。最小二乘分析结果表明, BB基因型个体同AA和AB基因型个体比较初生重的差异显著(P < 0.05), 3种基因型在初生重的大小排列顺序为AB > AA > BB; AA基因型个体同AB和BB基因型个体比较6月龄背膘厚的差异显著(P < 0.05), 3种基因型在6月龄背膘厚的大小排列顺序为BB > AB > AA。因此, 推测IGF2基因对个体的初生重和胴体瘦肉率存在一定的影响, 将IGF2基因应用于猪育种过程中的标记辅助选择可以加快猪的育种进程。  相似文献
5.
大仓鼠种群遗传多样性的季节性变化   总被引:5,自引:0,他引:5  
通过随机扩增多态性DNA(RAPD)方法,我们对河北省固安县牛驼镇王龙村附近的大仓鼠(Cricetuls triton)种群的遗传多样性进行了研究。结果显示,在209个大仓鼠个体中(春季60只,夏季45只,秋季59只,冬季45只),共扩增出87条带,其中86.2%原条带具有多态性,4个季节种群的遗传组成存在季节变化,其多态位点数,多态位点比率,Shannon多样性指数及Nei指数的大小顺序均一致表现为:秋季种群<冬季种群<夏季种群<春季种群;秋季种群的遗传多态性最低,春季最强;遗传多态性与种群密度(夹捕率,%),之间呈极显著的负相关关系。此结果表明遗传因素与大仓鼠种群动态有密切关系,但季节间遗传多态的变化不支持Ford假说,我们认为增殖和扩散共同决定了季节间遗传多样变化的规律。  相似文献
6.
大仓鼠年龄组及性别群体的遗传多样性   总被引:4,自引:0,他引:4  
本应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,采用多态位点率、Shannon信息多样性指数和Nei遗传多样性指数作为种群遗传变异的指标,研究了1998和1999年大仓鼠种群性别群体和年龄组群体的遗传多样性。主要的结论是:性别群体间遗传分化较小,年龄组群体间分化较大;年龄组相距越大,遗传分化也就越大;幼年组的遗传多样性高于老龄组的遗传多样性;1999年秋季种群的年龄组遗传分化和差异要比1998年四季种群更为明显。大仓鼠不同年龄组群体间的遗传分化支持遗传结构由于受时空上的选择压力而产生变异和适应性观点。大仓鼠幼体的遗传多样性比成体和老体的较高,这一结果倾向于支持Ford的假说,说明种群繁殖出的幼体遗传多样性高,其中有遗传质量好的,也有遗传质量差的,但在生存过程中,随着选择压力的作用,种群趋于适应,与环境不相适应的类型遭到淘汰,低质的幼体由于自然选择压力的增加而从种群中消失,致使成年和老年群体多态性逐渐降低。  相似文献
7.
动物种群遗传多态性研究中的PCR技术   总被引:2,自引:0,他引:2       下载免费PDF全文
基因组DNA的变异是种群遗传多态性研究的基础。PCR技术可以在反应管内经济快速地扩增特定DNA序列,在动物种群遗传多态性研究中的应用主要包括三个方面:(1)种群遗传多态位点的检测;(2)基因定位或利用已经定位的单拷贝基因设计染色体位点特异的分子标记;(3)与DNA测序技术相结合,高效经济地获取特定基因座位的全部遗传变异。  相似文献
8.
 以长白猪(73),大白猪(68),沂蒙黑猪(57)和莱芜猪(83)为研究对象,采用PCR-SSCP方法 对猪MyoG基因遗传多态性进行分析,并研究基因型与初生重、日增重、肌肉嫩度和背膘厚的相关性.根据猪MyoG 基因的DNA序列(M14331)设计引物,结果在内含子1扩增的片段上发现了一个多态性,检测到2个等位基因(A、B),3种基因型(AA、AB、BB),并对纯合子进行测序,发现2 943位G→C突变.基因型在不同猪种分布的多重比较,结果表明,大白猪与长白猪、沂蒙黑猪和莱芜猪比较差异显著(P<0.05),莱芜猪与长白猪和沂蒙黑猪比较差异显著(P<0.05),长白猪与沂蒙黑猪比较差异不显著(P>0.05).固定效应模型分析结果表明,初生重及嫩度基因型间差异显著(P<0.01),而日增重及背膘厚基因型间差异不显著(P>0.05).最小二乘分析结果表明,BB基因型个体与AA基因型个体比较肌肉嫩度的差异显著(P<0.05),AA基因型个体与AB和BB基因型个体比较背膘厚的差异显著(P<0.05).因此,推测MyoG基因对猪肉品质、生长速度及背膘厚存在一定的影响,将 MyoG基因应用于猪育种过程中的标记辅助选择将可以改善猪肉品质,提高生长速度,加快猪的育种进程.  相似文献
9.
试论细胞骨架系统   总被引:1,自引:0,他引:1  
试论细胞骨架系统徐承水,徐来祥(山东省曲阜师范大学生物系,273165)从现代对细胞超微结构的认识水平来看,细胞骨架不能等同于细胞质骨架。但在相当多的文献资料和参考书中不能将二者明显地区别开来[1-7],甚至对细胞骨架所包含的内容含糊不清,影响了人们...  相似文献
10.
大仓鼠DNA指纹谱探针的筛选   总被引:1,自引:0,他引:1  
采用一种简便提取高质量DNA的方法,从大仓鼠肝脏组织中提取其总DNA,分别以人工合成的微卫星核心序列(GTG)5和(CA)8做单一引物,进行特异引物PCR反应。电泳检测后回收15条特异性片段。与被标记过的大仓鼠基因组DNA反向杂交结果表明,15个片段中(GTG)5-8、(CA)8-1b和(CA)8-5b产生了较强的阳性信号。我们依据3个片段的测序结果设计适合DIG标记的探针,该探针得到的大仓鼠不同地理种群个体的指纹图谱有较高的个体特异性和种群多态性,而且与传统的来源于其它生物重复序列的探针如33.6和33.15形成的指纹图谱相比得到的变异适中,便于统计。  相似文献
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