精子特异性乳酸脱氢酶的免疫学特性及其应用

精子特异性乳酸脱氢酶特异地存在于鸟类和哺乳类动物的成熟睾丸和精子中，为精子的运动和存活提供能量，它是一种自身抗原，其天然抗体不与体细胞LDH同工酶发生交叉反应，用LDH－C4免疫小鼠或免疫等能够诱导免疫应答，导致生育率的降低，因此在人类避免和鼠害控制方面将有较好的应用前景。  

人重组γ-干扰素对兔妊娠的影响

ao et al. (1999) reported that human recombinet interferon gamma (hrIFN γ) exerted a certain anti contraceptive effect on the pregnant rabbit. In order to investigate the possible mechanisms by which interferon gamma (IFN γ) exerts its deleterious effect on pregnancy, 12 New Zealand breed rabbits were used as an animal model. One day (Day 1) after the females were mated with male animals, They were randomly divided into 3 groups. There were control, hrIFN γ 50 000 IU and hrIFN γ 100 000 IU groups. Saline and hrIFN γ of different doses were administered respectively to control and experimental rabbits via vaginal muscular injection on Day 6 and were killed on Day 12 of pregnancy. The fetus and placenta were weighed. The blood was collected before injection and at various intervals(6, 12, 24, 48 and 96 h) after injection. The concentration of serum progesterone were measured by radioimmunoassay. The apoptosis in placenta were examined by DNA fragmentation analysis. The results were as folloows: 1) In control, 50 000 IU and 100 000 IU hrIFN γ groups, progesterone level in serum were 26 20±0 74 ng/ml,17 81±0 55 ng/ml and 10 97±0 84 ng/ml respectively at 96 h after injection. In contrast with control group, progesterone production dropped significantly in rabbits treated with hrIFN γ, especially 100 000 IU hrIFN γ. 2) Apoptotic fragmentation of DNA(180 bp units) in placenta were detected both in control and experimental groups. The scan density of degraded DNA fragmentation in experimental group was higher than that in control, which suggested that apoptosis in placenta was further induced by hrIFN γ, especially by high dose hrIFN γ. In addition, the weight of placenta in rabbits treated with hrIFN γ reduced significantly as compared with that in control group( P <0 01). We suggest that hrIFN γ inhibits the secretion of progesterone, as a result of inducing apoptosis in placenta.  

卵透明带ZP3的研究及其应用

卵透明带蛋白围绕在卵母细胞外，在受精过程中起着重要作用。ZP3蛋白是卵透明带蛋白家族中的重要成员，在功能上，ZP3作为初级精子受体，起始精卵结合和顶体反应。由于ZP3在受精中的重要作用，它成为免疫避孕的有效靶点。ZP3蛋白疫苗和DNA疫苗可以诱导机体产生较强的免疫反应，导致生育降低，同时带来一定程度的副作用。本文重点介绍了ZP3的免疫特性及其应用。  

妊娠大鼠子宫和胎盘IL-1 β表达及IFN-γ对其表达的影响

为探讨妊娠过程中白介素 1β (IL 1β)表达的变化及干扰素 γ (IFN γ)对其表达的影响 ,以妊娠Spre qne Dawley大鼠为模型 ,采用逆转录 -聚合酶链反应的方法检测了妊娠不同时期子宫和胎盘IL 1βmRNA表达的动态变化及IFN γ对子宫和胎盘IL 1βmRNA表达的影响。实验结果表明 ,在胚泡植入子宫内膜前 ,子宫组织内IL 1βmRNA的表达较高 ,胚泡刚植入时 ,IL 1βmRNA的表达显著降低 ,之后 ,随着胚胎的发育和胎盘的增生 ,子宫组织内IL 1βmRNA的表达逐渐升高。妊娠早、中、晚期胎盘IL 1βmRNA没有显著性差异。注射超生理剂量的IFN γ后 ,植入前期、植入后期及妊娠中期和妊娠晚期IL 1βmRNA的表达均显著减少 ,胎盘IL 1βmRNA的表达在妊娠晚期出现下降。上述结果提示 ,高剂量的IFN γ对妊娠一定时期的大鼠子宫和胎盘IL 1βmRNA的表达有抑制作用  

妊娠大鼠子宫和胎盘中 TGF-β1 的表达及 IFNγ 对其表达的影响

采用半定量 RT-PCR、蛋白质印迹和免疫组化等方法，对大鼠妊娠过程中子宫和胎盘转化生长因子β1(TGF-β1) 的动态表达和表达定位，及体内注射超生理剂量的γ干扰素 (interferen-gamma， IFNγ) 后 TGF-β1 的表达进行检测，探讨了妊娠子宫和胎盘中 TGF-β1 的表达规律、定位及与 IFNγ的关系 . 正常妊娠各个时期大鼠子宫和胎盘中均能检测到 TGF-β1 mRNA 和蛋白质的表达 . 半定量 RT-PCR 结果表明：妊娠早期 (D1~D9) 子宫 TGF-β1 mRNA 的表达呈递增趋势，胚泡植入前 (D4) ，子宫 TGF-β1 mRNA 的表达较低，胚泡植入早期 (D6) TGF-β1 mRNA 的表达显著升高，植入后期 (D9) TGF-β1 mRNA 的表达达高峰，妊娠中期 (D15) 和妊娠晚期 (D19) TGF-β1 mRNA 的表达逐渐降低；妊娠早 (D9) 、中 (D15) 、晚期 (D19) 胎盘中 TGF-β1 mRNA 的表达呈时效递增， D15 胎盘中 TGF-β1 mRNA 的表达高于 D9 (P<0.01) ， D19 胎盘中 TGF-β1 mRNA 的表达高于 D15 (P<0.01). 免疫组化结果显示，妊娠早期 TGF-β1 主要在子宫蜕膜中表达，中晚期主要在滋养层表达 . 生殖道肌肉注射超生理剂量的 IFNγ能下调 TGF-β1 的表达，且呈一定的剂量依赖关系 . 提示：在妊娠不同时期子宫和胎盘中 TGF-β1 的表达呈显著的时空动态变化， IFNγ酌对 TGF-β1 mRNA 的表达有调节作用 .  

妊娠兔胎盘细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的动态变化

以新西兰雌兔为动物模型，研究妊娠期间胎盘细胞凋亡及其凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax表达的动态变化.基因组DNA凝胶电泳实验检测到妊娠中期和晚期胎盘基因组DNA中出现典型的凋亡特征——DNA梯带，而且DNA断裂值在妊娠早、中、晚期分别为：0.14、0.49和1.43，与妊娠早期相比，妊娠中、晚期胎盘基因组DNA断裂值有显著性增加.TUNEL实验和活化caspase-3的免疫定位实验表明，在妊娠早期胎盘中存在细胞凋亡，而且在各妊娠期中细胞凋亡主要发生于合体滋养层.免疫印迹法分析表明，Bcl-2和Bax随妊娠的进行其表达量明显增加，Bax∶Bcl-2比值在妊娠早、中、晚期分别为：0.89，0.91和1.25，呈增加趋势.实验结果说明，在兔正常妊娠中，胎盘合体滋养层细胞发生凋亡，且随妊娠的进行，凋亡细胞数量增多，胎盘细胞凋亡主要与细胞中Bax∶Bcl-2的比例相关.  

重组真核质粒pCMV4-rZP3′构建及在小鼠体内的表达

选取兔透明带ZPC基因序列的部分片段（编码263－415位的氨基酸,rZP3′）作为靶抗原，构建兔ZP3′基因疫苗，研究其阻断受精的效果。提取成熟雌兔卵巢的总RNA，RT－PCR克隆兔透明带ZPC的cDNA，直接插入到克隆质粒PCRR2．1中，构建克隆质粒PCRR2．1－rZP3′，再将靶片段用HindⅢ、X-bal双酶切从克隆质粒PCRR2．1－rZP3′切下，1％的低熔点琼脂糖电泳回收，亚克隆到真核表达质粒pCMV4中，构建真核表达质粒pCMV4-rZP3′。将质粒直接注射到活体小鼠的大腿内侧肌肉中，在mRNA水平上观察到质粒能在肌肉细胞中正确表达，并且其表达可以维持12周以上。  

生物实验数据的单因素方差分析

结合实例详细地叙述了生物学实验数据的单因素方差分析计算方法，介绍了根据计算结果如何分析组群间的差异显著性，具有较强的实用意义。  

人绒毛膜促性腺激素β亚基DNA疫苗的构建及其抗肿瘤作用的初步研究

人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCGβ)除了在正常的妊娠滋养层细胞中分泌外，在许多肿瘤细胞也大量分泌,是防治hCGβ依赖型癌症的有效目标分子之一.通过RT-PCR方法克隆全长的hCGβ基因，成功构建了PCR3.1-hCGβ DNA疫苗，其能够在HeLa细胞中高效表达hCGβ蛋白，表达的hCGβ蛋白主要存在于细胞内.将20 μg PCR3.1-hCGβ质粒DNA通过普鲁卡因盐酸盐(bupivacaine-HCl)药物诱导后接种小鼠肌肉，小鼠能够吸收质粒DNA，并表达编码的hCGβ蛋白抗原，表达的hCGβ被小鼠的免疫系统识别，同时激发hCGβ抗原特异性的体液免疫和细胞免疫反应，抗体滴度最高可超过1∶8000，并且这两种类型的免疫应答均能够在体外作用于HeLa细胞, 诱导其发生细胞凋亡，表明PCR3.1-hCGβ DNA疫苗激发的免疫反应在体外具有抗肿瘤作用.  

妊娠兔胎盘细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的动态变化

以新西兰雌兔为动物模型。研究妊娠期间胎盘细胞凋亡及其凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax表达的动态变化，基因组DNA凝胶电泳实验检测到妊娠中期和晚期胎盘基因组DNA中出现典型的凋亡特征-DNA梯带，而且DNA断裂值在妊娠早、中、晚期分别为：0.14,0.49和1.43，与妊娠早期相比，妊娠中，晚期胎盘基因组DNA断裂值有显著性增加，TUNEL实验和活化caspase-3的免疫定位实验表明，在妊娠早期胎盘中存在细胞凋亡，而且在各妊娠期中细胞凋亡主要发生于合体滋养层，免疫印迹法分析表明，Bcl-2和Bax随妊娠的进行其表达量明显增加，Bax:Bcl-2比值在妊娠早、中、晚期分别为：0.89,0.91和1.25，呈增加趋势，实验结果说明，在兔正常妊娠中，胎盘合体滋养层细胞发生凋亡，且随妊娠的进行，凋亡细胞数量增多，胎盘细胞凋亡主要与细胞中Bax:Bcl-2的比例相关。