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1.
顽拗植物龙眼基因组DNA提取方法的研究   总被引:22,自引:2,他引:20  
为从顽拗植物龙眼(Dimocarpus longan Lour.)叶片中获得可供后续分子生物学操作的基因组DNA.针对其组织细胞内富含多酚、多糖、单宁及色素等物质的特点,采用改进的CTAB法和SDS法,即在核裂解之前先破碎细胞.将存在于细胞质中的次生物质去除后再裂解细胞桉.结合其它一些改进措施.提取到的DNA沉淀呈纯白色.极易溶解于TE中。两种改进方法的OD260和OD280比值分别达到1.82和1.73,其鲜叶基因组DNA产量分别为103ug/g和127ug/g:RAPD扩增条带清晰,丰富.完全满足后续分子生物学操作的要求,其中改良CTAB方法效果更为理想,与之埘比.传统的CTAB法和SDS法提取到的DNA沉淀呈浅黄色甚至红褐色,很难被TE溶解,其OD260和OD280比值均低于1.5,也得不到扩增产物。  相似文献
2.
转化毛状根获得萝芙木生物碱的研究   总被引:21,自引:0,他引:21       下载免费PDF全文
药用植物萝芙木(Rauvolfia verticillata)的无菌苗被含有Ri质粒的发根农杆菌(Agro—bacterium rhizogenes)感染后,诱导出毛状根(Hairy root)。将毛状根分离,除菌后,在不合激素的Ms固体或液体培养基上培养,从296个株系中筛选出Rv 19、RV 26,RV 37和RV53Eq个生长速度快、分枝数量多等优良特性的无性系。对毛状根中次生代谢产物的提取和测定表明,四个无性系均含有原植物体所具有的吲哚生物碱。为应用转化毛状根技术获得植物次生代谢产物开辟了一条新的有效途径。  相似文献
3.
发根农杆菌介导的药用植物遗传转化研究进展   总被引:15,自引:0,他引:15  
发根农杆菌介导的植物遗传转人旨近年来发展起来的一项新的植物遗传转化技术。本文就发根农杆菌R1闰的结构、发根农杆菌介导的植物遗传转化的方法和步骤,以及运用这一技术获得药用植物次生代谢产物的研究进展作一全面介绍。  相似文献
4.
PCR技术在猴免疫缺陷病毒(SIV)感染模型中的应用   总被引:12,自引:5,他引:7  
目的(1)建立RT PCR方法,定性测定SIV感染猴血浆中病毒RNA,比较其与传统血浆病毒分离方法的敏感性;(2)建立DNA PCR方法,检测SIV感染猴外周血淋巴细胞(PBMCs)中的前病毒DNA。(3)检验DNA PCR和RNA PCR方法在猴SAIDS模型应用中的实用性和可操作性。方法用SIVmac251静脉感染恒河猴,定期采血,从血浆中提取病毒RNA,以RNA为模板通过RT PCR法扩增,凝胶电泳定性;从感染猴PBMC中提取带有整合的SIV前病毒DNA的细胞基因组DNA,巢式PCR扩增,凝胶电泳定性。结果DNA PCR和RNA PCR经两轮扩增后均得到一长度为477bp的特异条带,测序鉴定确为目的片段。9只实验猴感染SIV后7d,RNA PCR结果为79阳性,DNA PCR结果为100%阳性,而血浆病毒分离只有59阳性;此后一直到感染后的42d,RNA PCR和DNA PCR的结果一直为100%阳性,而血浆病毒分离阳性率在感染后35d下降到49,到42d时下降为零。结论PCR方法比病毒分离方法的敏感性高。尤其是DNA PCR,既可检测具有活跃病毒复制的受感染细胞,又可检测那些携带病毒处于转录休眠期的细胞,所以在感染的早期和中后期———血浆病毒水平较低的情况下或病毒处于潜伏感染的阶段,它作为猴艾滋病(SAIDS)模型病毒学指标之一有其必要性和重要性。这个指标的检测方法应该是较血浆病毒RNA检测更为敏感。  相似文献
5.
泗洱自然保护区种子植物区系特征分析   总被引:9,自引:0,他引:9  
在对泗洱自然保护区详细调查的基础上,对其种子植物的科、属的分布区类型进行了统计分析。结果表明:(1)保护区内种子植物类群丰富;(2)优势科、属明显;(3)区系起源古老;(4)地理成分复杂;(5)种子植物区系在科和属级水平上均显示出温带性质,同时泛热带类型丰富;(6)保护区内植被具明显的过渡性质;(7)分化现象明显,中间类型和特有种丰富。  相似文献
6.
SHIV病毒在猴体内的复制与传代   总被引:4,自引:2,他引:2  
目的为建立SHIV艾滋病动物模型提供毒力较强的病毒株,将新合成的SHIV XJ02170病毒适应猴体,并增强其毒力。方法实验前采集猴血清并进行血清学检查和PCR检测。选出13只无SIV,STLV1,SRV D和B病毒感染的猴。第一批实验,将SHIV前病毒DNA质粒经肌肉注射到猴体内,每只500μg;SHIV病毒液,经静脉注射到猴体内,每只2ml。病毒质粒和病毒液各接种2只猴。当第一批猴体检出病毒后,10ml感染猴的全血,抗凝后静脉注射到第二批猴体内,当第二批猴检出病毒后再将10ml感染猴的全血静脉注射到第三批猴体内,连续传代4次。每批实验均定期采集血液标本,分别用肝素和EDTA抗凝,进行病毒分离;病毒基因PCR检测;CD4,CD8测定;病毒抗体检测。结果SHIV XJ02170病毒和SHIV XJ02170前病毒DNA质粒在猴体内的传代中均能分离出病毒;从传代猴的血浆和外周血单核细胞(PBMC)中检出了病毒DNA和RNA基因;CD4,CD8测定结果显示有暂时性倒置现象,后变为正常倒置与正常交替出现;在传代的猴血清中检测出特异性HIV病毒抗体。结论SHIV XJ02170病毒与SHIV XJ02170前病毒DNA质粒,均能在恒河猴体内复制。  相似文献
7.
异丁香酚的生物转化及香兰素的合成   总被引:3,自引:0,他引:3  
利用粘质沙雷氏菌菌株AB 90027产生的离体酶催化异丁香酚进行生物转化,结合TLC、GC、UV-VISI、R等测试手段对异丁香酚的转化途径进行了探讨,借助薄层扫描法对不同反应体系下产物香兰素的产率作了比较,并研究了可催化异丁香酚合成香兰素的酶在细胞的存在位置。结果表明:在酶的作用下,异丁香酚分别经过阿魏酸和香兰素两条途径开环降解成小分子,中间产物香兰素产率可达10.90%,催化合成香兰素的酶主要是胞外酶。  相似文献
8.
张显强  张来  何跃军  冯晓英  孙敏 《生态学报》2010,30(12):3108-3116
生物结皮是由隐花植物和相关土壤微小生物与表层土壤颗粒胶结而形成的复合体,与维管束植物覆盖一样,它是干旱区地表的重要覆盖类型。苔藓是荒漠植被演替过程中常见的一类先锋植物,同时也是生物结皮中生物量最大的2个类群之一。研究了结皮细尖鳞叶藓的吸水机制和耐旱适应性。结果表明:细尖鳞叶藓最大吸水量和持水率分别达到干重的9.74倍和700%以上,动力学总吸水过程的表观Km值和Vmax值分别为21.67 g、10.42 g?g-1?DW?min-1,外吸水过程为28.91 g和8.56 g?g-1?DW?min-1,内吸水过程为43.18 g和1.76 g?g-1?DW?min-1。可溶性糖含量从142.6 mg?g-1?DW(CK)上升到344.3 mg?g-1?DW,增长近2.4倍,而游离脯氨酸积累微弱。抗氧化酶SOD活性变化不明显,在0.04U?g-1?FW上下浮动;POD活性在PEG6000胁迫浓度在20%之前呈大幅度上升状态,以后趋于缓和,30%时达最高的131 U?g-1?min-1?FW,增加近2倍;CAT活性的变化情况与POD变化趋势相同,但变化量较小。膜脂过氧化指标MDA先略有升高又逐步回落,说明细尖鳞叶藓抗氧化酶系统利用提高POD和CAT活性清除SOD在清除超氧阴离子自由基过程中产生的H2O2。因此,在喀斯特石漠化缺少土壤、极度干旱且保水能力弱的环境区域,结皮藓类植物以其特有的吸水特征、持水功能和抗旱机制等生态功能在石漠化治理、退化生态系统的恢复中具有十分重要的作用。  相似文献
9.
一种基于PCR技术鉴定单拷贝转基因烟草的方法   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
为了鉴定携带单拷贝外源基因的转基因烟草植株,以烟草核基因组上已知的单拷贝内源基因(RNR2)为内参,转基因烟草植株基因组DNA为模板,在同一PCR反应体系中扩增内源基因(RNR2)和外源目的基因(NPTⅡ)。反应产物在琼脂糖凝胶上电泳,获得了预期大小的两条特异性扩增条带。经ImageJ软件捕捉分析两条目的条带的灰度比,当T1代转基因烟草植株中外源基因与内源基因的扩增条带灰度比为1时,所检测植株即为单拷贝外源基因的转基因烟草植株。孟德尔经典遗传学方法证实了上述检测结果高度可信。  相似文献
10.
木本曼陀罗毛状根植株再生体系的建立   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
建立了木本曼陀罗(Datura arborea L.)毛状根的植株再生体系并对再生植株进行了初步检测.采用"一步法"诱导不定芽的适宜培养基为MS 6-BA 2.0 mg L-1 NAA 0.2 mg L-1;采用"两步法"诱导不定芽时,先在MS 6-BA 4.0 mg L-1 KT 0.5 mgL-1 2.4-D 0.5 mg L-1.上诱导愈伤组织,然后在MS 6-BA 4.0 mg L-1 NAA 0.2 mgL-1上诱导愈伤组织分化不定芽.诱导不定芽的最适宜生根培养基为1/2MS IBA 0.1 mgL-1.用PCR技术从再生植株叶片中得到了rolB、rolC目的基因片段.HPLC检测结果表明毛状根再生植株中莨菪烷类生物碱(Tropme alkaloids,TA)的含量较野生植株有明显的提高.  相似文献
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