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1.
为了探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(EBV-LMP1)促进细胞增殖,参与EBV相关疾病致瘤的分子机制,研究了LMP1在鼻咽癌细胞中调节cyclinD1表达,进而影响细胞周期行进及细胞恶性表型改变,并初步确定了LMP1发挥该功能的结构域.利用已建株的Tet-on-LMP1-HNE2鼻咽癌细胞系,蛋白质印迹实验分析LMP1诱导cyclinD1蛋白质表达的表达动力学,包括时间效应及剂量效应;利用三种LMP1功能区缺失的突变体及野生型LMP1,以载体型细胞为对照,确定LMP1活化cyclinD1表达的结构域.同时结合基因诱导表达及反义寡聚核酸技术阻断基因表达的实验方法,进一步确定LMP1上调的cyclinD1功能,即对细胞周期行进及细胞恶性表型的影响.结果表明LMP1确实可以诱导cyclinD1的表达(2~4倍),且诱导具有时间依赖性及剂量依赖性;利用三种LMP1功能区缺失的突变体及野生型LMP1,以载体型细胞为对照,结合报道基因分析法,确定与空白载体细胞系比较,野生型LMP1从转录水平可反式激活cyclinD1报道基因活性约11.2倍,其中CTAR1及CTAR2均可活化cyclinD1表达,但以CTAR2为主,与野生型LMP1诱导cyclinD1反式激活活性比较,CTAR1缺失导致cyclinD1报道基因活性下降23.6%,CTAR2缺失导致cyclinD1活性下降约80.7%,C端均缺失时cyclinD1活性只有野生型的17.7%.流式细胞仪分析显示,强力霉素诱导后cyclinD1高表达的细胞停留于G0/G1期明显减少,较未经诱导的细胞,从66.42%减至56.55%,而进入S期及G2/M期的细胞明显增多.在稳定表达LMP1的细胞中,与导入正义LMP1比较,导入反义LMP1 PS-ODNs及反义cylinD1,可以使细胞软琼脂集落形成率明显降低(从30.48%分别降至15.21%,21.76%).EBV-LMP1可以活化cyclinD1的表达,且发挥这种功能的结构域以CTAR2为主,活化的cyclinD1参与细胞周期行进,抑制LMP1及cyclinD1的表达均可导致细胞软琼脂集落形成率降低.  相似文献
2.
圆背角无齿蚌血细胞培养   总被引:11,自引:1,他引:10  
用新设计的培养基培养了圆背角无齿蚌的血细胞,在倒置相差镜下进行了活体观察及扫描电镜摄影,发现培养的血细胞无颗粒细胞、颗粒细胞、透明细胞和类淋巴细胞,前三者均能伸出长的伪足和突起,与瓶壁紧密贴附,呈体外培养的成纤维细胞型;后者呈圆形,不与瓶壁贴附;四者的比例约为4:2:3:1。在活体内注射或在培养基上加入PHA和ConA,培养2-7d中,每天取部分供加入秋水仙素,用空气干燥法制片,作染色体观察,但未观察到转化细胞和有丝分裂相。研究结果表明,圆背角无齿蚌的颗粒细胞、无细胞和透明细胞在体外贴附玻璃表面的特征与高等动物的巨噬细胞类似,而不贴瓶的圆形细胞与高等动物的淋巴细胞类似,但在体外培养均不能繁殖,它们可能是高度分化的细胞。  相似文献
3.
唐本安  唐敏 《生态学报》2000,20(6):1009-1014
1994年10月~1998年5月,对我国江南丘陵特有的木本油料植物油茶林地区的土壤动物布点调查,共获得土壤动物7147个,隶于6门13纲31个类(目)。针对土壤动物具有的生态特征对应油茶林林间地生境进行了相关分析,结果表明:目前人们在经营管理油茶林生产方式中,“以耕代育”林间地生境是油茶林生产中的最佳生境模式。在这种生樟模式下,土壤耕作层有机质相对丰富且均衡,土体溶重低,其土壤动物生态表现不但水平  相似文献
4.
EB病毒潜伏膜蛋白1调控细胞凋亡的cDNA阵列分析   总被引:9,自引:0,他引:9  
为探讨EB病毒潜伏膜蛋白(LMP1)介导细胞凋亡和抑制细胞凋亡双重效应的机制,采用已建立的受四环素调控的LMP1表达的鼻咽癌系统(pTet-on-LMP1 HNE2),定量诱导pTet-on-LMP1 HNE2细胞LMP1动态表达,分别与含有细胞凋亡相关基因为主的Atlas apoptosis cDNA expression array膜杂交,分析LMP1介导 的表达差异基因。结果表明:①LMP1介导细胞凋亡和抑制细胞凋亡的基因的表达,同时上调或下调某些细胞凋亡相关基因的表达;②LMP1不仅介导细胞凋亡和抑制凋亡基因的表达,同时介导细胞分裂分化和增殖基因的表达,LMP1同时介导功能不同甚至功能相反的基因表达;③LMP1介导的基因表达与其表达持续时间和表达水平相关,不同表达水平和不同表达时间介导的基因表达谱不同。因此,LMP1具有介导细胞凋亡和抑制凋亡基因表达的双重生物学效应,同时介导细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡等多种生物学效应基因的表达,从而参与细胞的癌变。  相似文献
5.
探讨了EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(LMP1)是否通过STAT3调控诱导血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达.利用蛋白质印迹的方法对HNE2、HNE2-LMP1以及瞬时转染STAT3显性负性突变体STAT3β的HNE2-LMP1细胞中VEGF含量进行检测,发现LMP1可以上调VEGF的表达,而STAT3β可以抑制VEGF的上调;利用LMP1可控表达细胞系tet-on-LMP1-HNE2进行LMP1时间和剂量诱导表达研究,发现VEGF可以随LMP1的动态表达而表达;将VEGF野生型报告基因和VEGF潜在的STAT3转录因子突变体报告基因与LMP1表达载体分别共转染研究发现,LMP1可以激活VEGF的转录,这种转录通过VEGF启动子区STAT3转录因子的结合位点发挥作用;电泳迁移率变动分析(EMSA)确证了STAT3的这种DNA位点的特异性活性.结果表明:EB病毒编码的LMP1 在鼻咽癌细胞中可以增加VEGF的转录和表达,并能通过VEGF启动子区STAT3转录因子结合位点发挥作用.  相似文献
6.
中西医结合治疗蝮蛇咬伤1576例体会   总被引:7,自引:4,他引:3  
目的 探讨中西医结合治疗蝮蛇咬伤的疗效.方法 回顾性总结1998~2007年我院应用中西医结合治疗蝮蛇咬伤患者1576例.局部采用不结扎、不切开、不低置患肢的改良方法.结果 1576例中治愈1575例,死亡1例,治愈率为99.94%:截指1例,致残率为0.06%;平均治愈天数为4.5天.结论 中西医结合治疗蝮蛇咬伤,局部采用"三不"疗法,提高了治愈率,降低并发症发生率,缩短病程.  相似文献
7.
海南东郊椰林生态系统土壤动物群落特征   总被引:7,自引:0,他引:7       下载免费PDF全文
2002年7月-2004年7月,对海南东郊椰林土壤动物进行了生态系统特征调查研究,获得土壤动物标本共5378只。为了研究结果的信度,选取1周年中的7月份(雨季)与1月份(旱季)捕量的4033只土壤动物作为研究对象,其中湿生线虫类为1253只,旱生土壤动物为2780只,隶属4门12纲27个类(目)。经与我国不同伟度地带分布的土壤动物生态区系特征比较,东郊椰林土壤动物具有较为明显的热带性土壤动物群落的特征。对照原始热带山地雨林土壤动物群落分析表明,虽同属热带雨林环境,东郊椰林土壤动物因受单一树种、面临季风海域地理位置、土壤质地(pH值与盐度偏高)、土壤湿度等生境因素的影响,群落结构还具有种类并不很丰富,优势度指数(Cc)偏高,多样性指数(H’)偏低热带雨林性土壤动物群落的分异特征。在进行椰林区异质小生境土壤动物分析中还发现,院落周边椰林地因土壤动物丰富。土壤生态系统良好,椰树的年产果率均高于其它异质的小生境椰林地,说明在东郊椰林生态系统中,土壤动物的丰度与椰树产果率也呈现出较好的正相关性。  相似文献
8.
黄土丘陵区不同土地利用类型土壤水分变化特征   总被引:7,自引:0,他引:7  
土壤水分是制约黄土丘陵区生态建设和土地可持续利用的关键因子,认识不同土地利用类型的土壤水分状况对该地区植被恢复和土地资源的有效利用具有重要的理论和实际意义.本研究采用EC-5土壤水分传感器,对黄土高原园则沟流域坡耕地、梯田、枣园和草地生长季内(5—10月)0~160 cm土壤剖面含水量进行连续监测,探讨这4种典型土地利用类型的土壤水分变化特征.结果表明:在降水常态年和干旱年,不同土地利用方式土壤水分的季节变化、蓄水特征及垂直分布均存在差异.在2015年干旱年,梯田表现出良好的蓄水保墒效果,0~60 cm土层生长季平均土壤含水量分别比坡耕地、枣园和草地高2.6%、4.2%、1.8%(P0.05),0~160 cm土层储水量分别比坡耕地、枣园和草地高43.90、32.08、18.69 mm.在2014年常态年,枣园0~60 cm土层生长季平均土壤含水量分别比坡耕地、梯田和草地低2.9%、3.8%、4.5%(P0.05);在干旱年,0~160 cm土层有效水储量仅占土壤总储水量的35.0%.不同土地利用方式下均是表层(0~20 cm)与中层(20~100 cm)土壤水分的灰色关联度较大,且土壤水分变化态势的相似程度表现为梯田草地坡耕地枣园.对于试验区内的坡耕地,可考虑改造为梯田,以提高雨水资源的有效利用、促进生态农业建设;而针对黄土丘陵区旱作枣园土壤缺水严重的现象,需采取适当水分管理措施以降低枣树自身耗水和其他无效耗水,实现枣园可持续发展.  相似文献
9.
为了探讨在鼻咽癌细胞(NPC)中是否存在EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)/JAK3/STAT信号传导途径,首先采用RT-PCR方法对NPC JAK家族4种成员检测,发现在两株鼻咽癌细胞株CNE1和HNE2中该家族4种成员均有表达.选择最有可能与LMP1相互作用的JAK家族成员JAK3作为我们的研究对象.利用已建立的一株受四环素衍生物强力霉素(doxycycline,Dox)调控的LMP1表达的鼻咽癌细胞系(Tet-on-LMP1 HNE2),诱导Tet-on-LMP1 HNE2细胞LMP1动态表达,蛋白质印迹发现JAK3的表达方式呈剂量和时间依赖性.采用瞬间转染方法将STAT报告基因质粒(GRR-Luc)转染入pTet-on-LMP1 HNE2细胞中,不同剂量的Dox促使LMP1的表达可以激活STAT报告基因活性,在0.06mg/L Dox诱导36 h时,STAT活性最高.在该条件下,加入3 μmol/L JAK3特异性抑制剂WHI-P131时,可抑制STAT的活性.结果表明:JAK3的表达在NPC细胞中受LMP1的调控,LMP1可以通过调控JAK3的表达参与STAT的活化.在鼻咽癌细胞中存在LMP1/JAK3/STAT信号途径并可能在其发生发展过程中起重要作用.  相似文献
10.
EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞中调控核转录因子κB活性研究   总被引:7,自引:0,他引:7  
廖伟  唐敏  邓锡云  曹亚 《病毒学报》2000,16(3):198-202
为了探讨EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)的致瘤机制,对鼻咽癌细胞中LMP1通过核转录因子kB(NFkB)介导的信号传导途径在鼻咽癌变中的意义进行了研究。利用LMP1受四环素衍生物强力霉素诱导表达的鼻咽癌细胞Tet-on-LMP1HNE2,通过NFkB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)及细胞集落形成率等方法,结合硫代磷酸反义寡核苷酸阻断技术,证实LMP1增强鼻咽癌细胞NFkB的DNA结合活性  相似文献
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