微丝相关新蛋白hHBRK1相互作用蛋白质的鉴定

为了鉴定hHBRK1的相互作用蛋白,通过DNA重组构建重组表达质粒pGEXhHBRK1,并以谷胱甘肽Sepharose4B亲合层析法,获得纯化的重组融合蛋白GSThHBRK1.以小鼠心肌组织为研究对象,采用GSTpulldown技术结合Western印迹法,证实hHBRK1与小鼠心肌肌钙蛋白TEa亚型(EacTnT)相互作用.结果提示,hHBRK1与EacTnT结合,可能参与心肌微丝的聚合,为小鼠cTnT众多的剪接体,提供了一种可能的功能定位.     

结构生物学研究中的eIF-5A的表达与纯化

真核细胞翻译官始因子eIF-5A（eukaryotic initiation factor 5A）是迄今发现的惟一含有特殊氨基酸hypusine残基的蛋白质,其具体生物学功能仍不明确。为了推进对其功能的研究,拟从结构生物学入手,对其结构进行核磁共振（NMR）结构解析。利用GST融合蛋白原核表达系统,将eIF-5A进行原核表达,经过优化表达与纯化条件,得到了高产率与高纯度的可溶性eIF-5A用以进行NMR测试：经过!1H-^15N HSQC NMR实验,发现其适合应用NMR方法进行结构解析,从而为溶液中eIF-5A三维构象的研究奠定了基础.     

CUEDC2中CUE结构域的表达纯化及结构初探

目的:建立CUEDC2中CUE结构域的原核表达系统,获得13C、15N同位素标记的CUE结构域蛋白质,以用于结构生物学研究。方法:利用分子生物学方法将CUE结构域编码序列构建到pET-28a原核表达系统,表达和纯化13C、15N标记的重组蛋白;用SDS-PAGE等方法对其进行鉴定。结果:目的蛋白经SDS-PAGE和MALDI-TOF/MS检测,相对分子质量正确,圆二色谱和核磁共振波谱结果显示目的蛋白折叠良好。结论:获得了高浓度、高纯度、折叠良好的CUE结构域标记蛋白质,利于进一步的结构生物学研究。     

人微丝相关蛋白hHBRK1突变体的亚细胞定位

 hHBrk1是本研究室利用抑制性消减杂交手段,从人支气管上皮细胞恶性转化株BERP3 5中克隆到的差异高表达基因.hHBRK1蛋白家族序列在动、植物界高度保守,含有一个7重复 (heptad repeat, HR) 结构域.利用绿色荧光蛋白(GFP)报告系统,发现野生型hHBRK1蛋白在胞浆中弥散分布,在细胞运动前沿富集,与细胞片状伪足的微丝共定位.hHBRK1- R54和hHBRK1-S56 G57蛋白在胞浆弥散分布,但失去了在细胞运动前沿富集的特征.hHBRK1ΔN(1-45)在细胞内弥散分布,而hHBRK1ΔC(46-75)选择性地在高尔基体富集.研究提示,hHBRK1蛋白为微丝相关蛋白,结构的完整性是其发挥功能的前提.hHBRK1蛋白可能通过HR结构域调控微丝聚合,从而参与微丝依赖性的细胞运动或物质运输.     

CUEDC2的N端结构域溶液结构初步探索

目的:为了更好地研究CUEDC2(CUE domain containing 2)的生物学功能,对其N端含133个氨基酸残基的结构域的三维结构进行初步探索。方法:用亲和纯化方法纯化GST-CUEDC2(1-133 aa)和His-CUEDC2(1-133aa),采用圆二色谱和核磁共振方法初步研究其结构。结果:圆二色谱实验表明CUEDC2(1-133 aa)cut比CUEDC2(1-133 aa)uncut的螺旋结构更多,折叠更好;核磁共振实验表明CUEDC2(1-133 aa)cut的1H-15N HSQC谱交叉峰更多,峰强度更均匀。结论:CUEDC2(1-133 aa)cut为最适合用核磁共振方法进行结构计算的片段。     

滇黄精中一个三萜皂苷的NMR研究

从滇黄精新鲜根茎中首次分离得到一个三萜皂苷,拟人参皂苷-F11。本文利用1D NMR和2D NMR对其碳、氢信号进行了全归属,并对文献中报道的碳谱数据进行了纠正。