恒河猴(Macaca mulatta)转移因子的研究 Ⅰ转移对结素和破类延迟超敏反应到人的实验研究

将对结素和破类呈现阳性皮肤延迟超敏反应的恒河猴的淋巴结和脾脏剪碎,匀浆,过滤和高速离心,以葡聚糖G25凝胶过滤分离成6个组分。只有组分Ⅳ不仅能将皮肤延迟超敏反应在同种异体之间转移,而且能从恒河猴转移到人。不管TF供体和培养淋巴细胞供体对抗原的应答如何,所有组分均有增强SK—SD刺激淋巴细胞转化作用,组分Ⅲ和Ⅳ的混合物作用最强。组分Ⅲ和Ⅳ对人的淋巴细胞亦有类似的作用。因此,恒河猴TF增强抗原刺激淋巴细胞转化的作用是没有抗原特异性和种属特异性的。 初步的生化分析表明,组分Ⅳ含有RNA,多肽和次黄嘌呤,薄层色谱有2个254nm紫外光吸收成分和2个节三酮显色成分,等电点聚焦电泳时出现17条考马斯兰R250着色带。 这些结果说明,有可能用恒河猴制备某些人类疾病的特异性TF。     

树qu免疫细胞体外感染Ⅰ型人免疫缺陷病毒的实验研究

至今可以感染Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)的动物只有黑猩猩和长臂猿，这严重阻碍了HIV-1的疫苗研究和治疗研究。因此，寻找新的可以感染HIV-1的动物模型成为十分迫切的课题。已知树qu对许多重要的医学病毒易感，为了探讨树qu是否可以感染HIV-1，利用不同辅助受体的5种HIV-1病毒株，体外感染云南野生成年树qu的淋巴细胞和单核/巨噬细胞；同时还用这些病毒感染人外周血淋巴细胞或单核细胞。然后用RT-PCR、PCR和流式细胞术分别进行检测。用RT-PCR方法未检测到感染上清中有病毒粒子的存在，用PCR法未能发现树qu的这些免疫细胞中有前病毒DNA，用流式细胞术也未能在这些感染HIV-1的树qu细胞的表面检测到特异抗原；而感染HIV-1的人免疫细胞均为阳性结果。实验结果表明树qu的这些免疫细胞在体外未能感染上HIV-1，可能的原因是树qu的这些免疫细胞的HIV-1受体(CD4)和辅助受体(CCR5或CXCR4)与人的免疫细胞差别较大。     

用猴艾滋病D型逆转录病毒筛选抗艾滋病药物实验模型的建立及应用

以药物对合胞体形成的抑制和对细胞的毒性作为检测指标,应用猴艾滋病D型逆转录病毒（SRV）／Raji细胞系统建立了体外筛选抗艾滋病药物的实验模型。AZT和天花粉蛋白可显著地抑制SRV诱导的合胞体形成,它们的选择指数（SI）分别为数13500和8812。用该模型筛选了46种来源于天然资源的化合物,结果表明有11种天然化合物有明显的抗病毒活性。     

灵长类淋巴细胞亚群的研究——Ⅰ.外周血和淋巴组织的SRBC、SMRBC和ZYC玫瑰花结形成细胞的测定

用经过氨乙基异硫脲(AET)或神经氨酸酶(VCN)处理过的绵羊红细胞(SRBC),酵母多糖—补体复合物(ZYC)和红面猴红细胞(SMRBC)作为标记,测定了健康恒河猴、熊猴、豚尾猴、红面猴和树鼩的外周血以及恒河猴淋巴样组织的淋巴细胞亚群,在这五种动物中,E_(AET)玫瑰花结形成细胞的百分比依次为78.1±6.4,77.7±4.2,76.0±6.4,82和24.9±7.2。ZYC形成细胞的百分比依次为11.4±4.2,9.0±3.8,12.8±2.2,15和15.7±7.4。恒河猴胸腺,脾脏和淋巴结的E_(AET)形成细胞的百分比分别为95.2±2.9,28.8±10.3,44.8±6.2。与人类不同,SMRBC不是恒河猴B淋巴细胞的标记。此外,还与其他作者的结果进行了比较。     

日本灵长类学研究现状

日本的灵长类学研究工作主要是在大学、国立的研究所和私立研究所内进行。1956年,日本猴子中心在犬山市成立,并出版“Primates”杂志,1967年京都大学灵长类研究所成立,同年,实验动物中央研究所亦开始进行灵长类动     

四步法消除SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR中引物二聚体的影响

为建立一种新的SYBRgreenⅠ实时定量RT PCR方法 ,使之能够有效消除引物二聚体 (PDs)对实时定量结果的影响 .对RT PCR特异性扩增产物和PDs分别进行了凝胶电泳检测和熔解曲线分析 .依据PDs和扩增产物的熔解温度 (Tm)特点 ,在通用的三步法的延伸步骤之后 ,增加一个短暂的 (5s)恒温和荧光检测步骤 ,使这个步骤的温度高于PDs的Tm,但低于扩增产物的Tm,简称该法为四步法 .PDs的Tm 通常高于 72℃ ,但低于扩增产物的Tm .将四步法第四步的温度设置在高于PDs的Tm ,但低于扩增产物的Tm 时 ,四步法能够有效地消除PDs的影响 .对三步法和四步法SYBRgreenⅠ实时定量RT PCR进行了比较 ,发现三步法根本不能用于RNA的实时定量 ,而四步法能够实现包括低丰度RNA在内的RNA的定量 .选择Tm 值尽可能小的引物 ,使PDs与扩增产物Tm 值之间有足够的差距 ,将更有利于四步法的应用 ,并可成功地用于低丰度RNA的准确定量     

检测HIV-1载量的荧光实时定量PCR技术的建立及其应用

准确测定HIV 1的前病毒载量和病毒载量的技术 ,在感染者预后和艾滋病患者药物治疗效果的评价以及艾滋病的其它研究方面 ,都具有十分重要的应用价值。以定量的HIV 1DNA和RNA为标准外参照 ,利用SYBRGreen荧光染料和GeneAmp5 70 0SequenceDetectionSystem (5 70 0系统 ) ,建立了测定HIV 1的前病毒载量和病毒载量的荧光实时定量PCR技术。以病毒感染细胞和培养上清为材料 ,测定了三种化合物 (AZT ,GL和WT)对细胞内的前病毒载量和培养上清中的病毒载量的抑制活性 ,并与合胞体形成抑制方法测定化合物抗病毒活性的结果进行了比较。根据病毒载量、前病毒载量和合胞体形成计算出的三种化合物的治疗指数均依次变小 ,提出以荧光实时定量PCR技术测定前病毒载量 ,会在评价药物在体内外根除或减少存在于CD4休止或记忆T淋巴细胞中的HIV 1前病毒方面有特别的价值。     

树鼩免疫细胞体外感染Ⅰ型人免疫缺陷病毒的实验研究

至今可以感染Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1)的动物只有黑猩猩和长臂猿 ,这严重阻碍了HIV 1的疫苗研究和治疗研究。因此 ,寻找新的可以感染HIV 1的动物模型成为十分迫切的课题。已知树对许多重要的医学病毒易感 ,为了探讨树是否可以感染HIV 1,利用不同辅助受体的 5种HIV 1病毒株 ,体外感染云南野生成年树的淋巴细胞和单核 /巨噬细胞 ;同时还用这些病毒感染人外周血淋巴细胞或单核细胞。然后用RT PCR、PCR和流式细胞术分别进行检测。用RT PCR方法未检测到感染上清中有病毒粒子的存在 ,用PCR法未能发现树的这些免疫细胞中有前病毒DNA ,用流式细胞术也未能在这些感染HIV 1的树细胞的表面检测到特异抗原 ;而感染HIV 1的人免疫细胞均为阳性结果。实验结果表明树的这些免疫细胞在体外未能感染上HIV 1,可能的原因是树的这些免疫细胞的HIV 1受体 (CD4)和辅助受体 (CCR5或CXCR4)与人的免疫细胞差别较大