人脐带和骨髓间充质干细胞体外分离培养及生物学特性比较

目的体外分离培养、扩增人脐带间充质干细胞(h UC-MSC)和人骨髓间充质干细胞(h BM-MSC),并对其生物学特性进行比较。方法采用组织块贴壁法从足月胎儿脐带分离、纯化和培养h UC-MSC,健康成人骨髓肝素抗凝后,采用密度梯度离心法分离、纯化和培养h BM-MSC;用倒置显微镜观察两种细胞的形态及细胞生长增殖情况,流式细胞仪分析检测第3代细胞表面标志的表达,Von?Kossa染色及油红O染色检测分化潜能。结果镜下两种细胞均为贴壁生长,形态为均一的成纤维细胞样,取相同数量的细胞传代接种后,h UC-MSC的增殖速率快于h BM-MSC,两种细胞具有均一的细胞表型,均表达CD29、CD44、CD105,不表达CD45、CD34、HLA-DR、HLA-G、CD80、CD86,两种细胞都有成骨、成脂分化潜能,但h UC-MSC的分化潜能更强。结论 h UC-MSC与h BM-MSC具有相似的生物学特性,且前者具有更强的增殖能力和分化潜能,h UC-MSC有望成为h BMMSC理想的替代来源。     

人类白细胞抗原半相合供者外周血细胞因子诱导的杀伤细胞治疗晚期原发性肝癌二例

目的 观察半相合供者细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗晚期肝癌的临床疗效.方法 2 例无法手术且无法耐受化疗的晚期肝癌患者分别选取人类白细胞抗原(HLA)半相合健康供者体外培养CIK,14 d 后分次回输给相应患者,观察患者治疗前后瘤体大小、肿瘤标志物、免疫指标、临床症状、生活质量和卡氏评分等的变化.结果 2 例患者...     

结核分枝杆菌临床株4种耐药基因的检测与分析*

结核分枝杆菌 Mycobacterium tuberculsis（M.t）4种耐药基因的研究,了解耐药基因突变情况和耐药水平的关系。108例临床痰标本临床分离株均做传统梯度药敏试验和聚合酶链反应多态-单链构象多态性（PCR-SSCP）试验。结果表明耐SM（rpsL）REP（rpoB）INH（katG）EMB（embB）基因突变率分别为78.5％,68.2％,70.5％,48.6％。其中,上述高耐药株基因突变率分别为86.5％,89.3％,84.3％,35.3％。低耐药株分别为28.5％,16.5％,7.1     

脐带间充质干细胞外泌体的分离和鉴定

目的探讨脐带间充质干细胞的外泌体的获取与鉴定方法。方法通过组织块贴壁法从胎儿脐带分离和培养脐带间充质干细胞并通过RiboTMExosome Isolation Kit收集外泌体,采用电镜和流式细胞仪鉴定外泌体。结果第二代脐带间充质干细胞表面CD45、CD34和HLA-DR呈阴性表达,CD29、CD44和CD105呈阳性表达;在透射电镜下观察到脐带间充质干细胞外泌体呈圆形或椭圆形,大小不均匀,直径30~100 nm,有完整的膜结构,内含低密度物质;流式细胞检测外泌体CD9、CD63、CD81和CD83呈阳性表达。结论在培养脐带间充质干细胞的培养基中可以收集到外泌体,可以通过电镜和流式细胞仪对脐带间充质干细胞的外泌体进行鉴定。     

间充质干细胞免疫抑制作用及其在移植免疫中应用的研究进展

间充质干细胞(MSC)是一类具有自我更新、增殖和多向分化潜能的干细胞,具有向内、中、外3个胚层包括肌腱、韧带、肝细胞、心肌细胞和骨髓基质细胞等分化、发育的潜能。有研究表明,MSC具有较低的免疫原性,它可以通过与免疫细胞直接接触和分泌细胞因子等机制发挥免疫调节作用,从而成为移植免疫领域的研究热点,本文就MSC的生物学特性、免疫抑制作用及在移植免疫中的应用做一综述。     

HLA-G5与器官移植排斥反应的关系研究

目的:探讨HLA-G5表达与器官移植排斥之间的关系。方法:应用酶联免疫方法检测移植术后2个月以上的50例肝移植受者和60例肾移植受者外周血HLA-G5的表达情况。结果:肝、肾移植受者中HLA-G5阳性表达受者的急慢性排斥反应发生率明显低于阴性表达受者。结论:HLA-G5的表达与肝、肾移植受者排斥反应发生率的降低密切相关。     

结核分枝杆菌临床株4种耐药基因的检测与分析

结核分枝杆菌Mycobacterium tuberculsis(M.t)4种耐药基因的研究,了解耐药基因突变情况和耐药水平的关系。108例临床痰标本临床分离株均做传统梯度药敏试验和聚合酶链反应多态-单链构象多态性（PCR-SSCP）试验。结果表明耐SM（rpsL）REP(rpoB）INH(katG）EMB（embB）基因突变率分别为78.5%,68.2%,70.5%,48.6%。其中,上海高耐药株基因突变率分别为86.5%,89.3%,84.3%,35.3%。低耐药株分别为28.5%,16.5%,7.1%。EMB在低耐药区无基因突变。M.t的4种耐药基因联合检测的分析,在国内外很少报道。部分M.t的耐药由耐药基因突变所致,M.t耐药基因突变与耐药水平密切相关,且M.t基因突变绝大多数发生在高耐药区中,也有少部分在低耐区株中发生。     

HLA-G参与骨髓间充质干细胞的抑制作用机制探讨

目的：探讨人骨髓间充质干细胞（MSC）在活体肾移植供受者间的混合淋巴细胞培养（MLR）中的作用机制,证明人白细胞抗原（HLA）-Ⅰ类分子HLA-G参与了MSC的免疫调节作用。方法：从人骨髓中分离培养MSC,采用形态学观察及流式细胞术分析鉴定后,加入活体肾移植供受者间的MLR,观察MSC的HLA-G表达及对T细胞增殖的影响,淋巴细胞增殖实验采用MTT法。结果：MSC细胞表面和胞浆内均表达HLA-G,流式细胞术分析细胞表面HLA-G平均表达率为37.3%,胞浆内HLA-G平均表达率为65.1%,ELISA法检测细胞培养上清中可溶性HLA-G含量为18.9ng/mL。将MSC和培养上清液加入活体肾移植供受者间的MLR体系中,均使得T细胞抑制率增高;而加入HLA-G特异性抗体,MSC的抑制率降低。结论：MSC表面和胞浆内均有HLA-G表达,在其培养上清中检测到由MSC分泌的可溶性HLA-G5;MSC表达和分泌的HLA-G是其发挥抑制功能的关键因素之一。为MSC在预防器官移植术后排斥反应的临床应用提供了理论依据。     

巨细胞病毒早期抗原pp65和晚期抗原pp67-mRNA在移植术后活动性巨细胞病毒感染诊断中的价值

目的：通过对器官移植术后受者外周血中巨细胞病毒（CMV）早期抗原pp65和晚期抗原pp67-mRNA的监测，评价其对于诊断器官移植术后CMV感染、发病及预后的价值，为临床准确有效地分析理解检测结果提供依据。方法：收集28例器官移植受者EDTA抗凝外周血标本共120份，用免疫荧光技术（IFA）检测其中CMV早期抗原pp65；用核酸基础序列扩增法（NASBA）测定晚期CMVpp67-mRNA，绘制2组用于诊断CMV的受试者特征曲线（ROC曲线），比较2组曲线下面积。结果1120份样本中，42份为CMVpp65阳性（≥1个阳性细胞／2×105白细胞），23份为CMVpp67-mRNA阳性。28例器官移植受者中，9例CMVpp65和pp67-mRNA均为阳性（其中3例pp65和pp67-mRNA在同一时间为阳性），8例pp65为阳性而pp67-mRNA为阴性，2例pp65为阴性而pp67-mRNA为阳性。临床诊断感染CMV的患者4例，在感染早期无临床症状病毒潜伏期间，受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）pp65为0．9542，pp67-mRNA为0．6611，即pp65检测的灵敏度和特异性高于pp67-mRNA；而在出现临床症状并治疗后期，pp65的AUC为0．8300，pp67-mRNA为0．9232，pp67-mRNA的灵敏度和特异性高于pp65。根据ROC曲线查得，以每2x105白细胞中有10个阳性细胞为诊断CMV活动性感染的最佳临界值。结论：AUC结果表明，pp65、pp67-mRNA均具有诊断意义。pp65检测更适于早期CMV活动性诊断，对于提示临床开始抗病毒治疗具有早期快速的意义；pp67-mRNA检测快速、结果准确，可作为结束抗病毒治疗的参考指标；两者联合检测用于监测CMV，对于辅助临床诊断有很好的价值。