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PQR转运体基因赋予大肠杆菌BL21百草枯抗性 总被引：4，自引：0，他引：4
前期研究中成功地分离了2个对百草枯具有高度抗性的土壤细菌SPQ03和SPQ14.本研究从这两个菌分别克隆了基因PnPQR和OaPQR,二者ORF全长均为1 233 bp,编码410个氨基酸残基,含有11个跨膜区(TMS),属于非典型的主要易化超家族(major facilitator superfamily, MFS).立体结构分析表明,蛋白的N端和C端分别由5个和6个由α-螺旋组成的跨膜区.只有P151L和P154V两个氨基酸不同.将两个基因在大肠杆菌BL21菌株中异源表达,能提高大肠杆菌对百草枯的抗性,但不能提高其对过氧化氢的抗性. 相似文献
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本研究利用RT-PCR方法从甜叶菊叶片中分离了一个与甜菊醇糖苷生物合成密切相关的基因KA13H,对该基因的ORF、编码产物结构、同源性比对及次级结构等进行了生物信息学预测分析,同时初步分析该基因的组织表达和原核表达。经DNAMAN6.0软件分析,该基因编码一条分子量为54.476kD的由476个氨基酸残基组成的多肽,含有典型的细胞色素P450的血红素结合位点FXXGXXXCXG,TMPRED程序预测其C-端含有一个明显的跨膜区MIQVLTPILLFLIFFVFWKVY,是一个典型的细胞色素P450基因。推断的KA13H编码产物与其它生物合成相关细胞色素P450同源比对和系统发生分析表明,该蛋白与苜蓿(Medicago truncatula)CYP716A12和云杉(Sitka spruce)CYP720B1的一致性较高,分别为51%和46%,推测KA13H可能与CYP716A12和CYP720B1具有类似的功能。KA13H次级结构分析结果表明,KA13H与CYP74A2的一致性仅为15%,但是它们却有着类似的次级结构,都含有6个基质识别位点(SRSs)。半定量RT-PCR分析表明:KA13H在根、茎、叶和花中呈组成型表达,叶和花中的表达丰度较高;将该基因融合到原核表达载体pGEX-4T-1中,在原核中得到了成功表达。根据本研究结果,我们推测KA13H可能在甜菊醇糖苷生物合成过程中发挥着重要作用,该基因的克隆和表达分析为进一步深入了解甜菊醇的生物合成过程中相关酶和基因的功能奠定了基础。 相似文献
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甜叶菊组织中酚类、萜类和多糖等代谢产物含量较高,RNA难分离,易降解,使用现有的方法提取甜叶菊组织RNA产率低、质量差,无法应用于实验操作.本文针对甜叶菊组织次生代谢物多的特点,以传统的CTAB法(cetyl trimethyl ammonium bromide)为基础,分别采用不同的方法进行RNA抽提和纯化.结果发现采用CTAB-LiCl法提取的RNA完整性好,且纯度高;传统的CTAB法提取的RNA完整性好,但有DNA和其它杂质的污染;高盐溶液法提取的RNA降解比较严重,同时还有杂质污染.结论说明CTAB-LiCl法适用于多糖类植物RNA的分离. 相似文献
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