同时表达多种外源基因的非复制型重组痘苗病毒的构建

利用非复制型痘苗病毒载体,构建了能同时表达乙型肝炎（乙肝）病毒ＳＳ１、麻疹病毒ＨＡ和Ｆ及白细胞介素２（ＩＬ－２）的非复制型重组痘苗病毒ＶＩＨＩＬ２△ＣＫＳＳ１,及其相应的复制型重组豇轩病毒ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１。这两株重组病毒在ＣＥＦ细胞上连续传至第２５代,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ,两株病毒均在Ａ２４、Ａ２７间稳定整合有ＳＳ１基因,非复制型重组病毒Ｃ、Ｋ间基因稳定缺失。经ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ     

IL-5在非复制重组痘苗病毒中的表达及其对重组病毒免疫效果的影响

利用非复制型痘苗病毒表达载体 pNEOCK11β75IL5和重组病毒RVJ12 3,通过两步重组构建了能同时表达IL 5和乙型肝炎病毒HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ12 3Δ11β75IL5。Southern blot证实 ,痘苗病毒C K片段间基因缺失的同时伴有IL 5基因的插入。鼻腔吸入分别免疫Balb/c小鼠和新西兰白兔 ,ELISPOT实验证实 ,免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgA抗体分泌细胞 (ASC)数比对照组 (RVJ12 3Δ11β75 )增加约 2倍 ,而同时小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgG抗体分泌细胞 (ASC)数与对照组无差别。可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其它分泌液样品中检测到抗乙型肝炎病毒HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体 ,与对照组相比 ,IgA抗体阳转率及抗体滴度提高 ,而IgG则无差异。本实验说明 :IL 5可在体内选择性地增强机体的粘膜IgA反应。提示非复制载体疫苗中 ,表达的该细胞因子可有效的增强疫苗的粘膜免疫反应 ,为粘膜疫苗的发展策略提供了新的途径     

非复制型多价重组痘苗病毒粘膜与细胞免疫效果

对已构建的同时表达乙型肝炎病毒ＳＳ１、麻疹病毒ＨＡ和Ｆ以及ＩＬ２的非复制型重组痘苗病毒ＶＨＦＩＬ２△ＣＫＳＳ,及其相应的复制组病毒ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１,进行了兔皮内毒力、粘膜免疫和细胞免疫效果的比较研究。发现ＶＨＦＩＬ２△ＣＫＳＳ在兔皮内的毒力明显低于ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１。ＶＨＦＩＬ２△ＣＫＳＳ１经空肠内免疫家兔４周后,可在肠粘膜表面诱发特异性ＩｇＡ抗体,在血液中诱发特民性的ＩｇＧ抗体,其抗ＳＳ１和抗