6A型肺炎球菌结合物分子大小对小鼠免疫原性的影响

目的 比较不同分子大小的6A型肺炎球菌(serotype 6A Streptococcus Pneumoniae )结合物和佐剂吸附在小鼠体内免疫原性的影响。方法 通过乙酸水解降低6A型荚膜多糖的相对分子质量制备成水解物,水解物经1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化并与破伤风类毒素己二酸酰肼衍生物TT AH 结合,制备成结合物。用Sepharose 4 Fast Flow 纯化结合物,并根据化学检测结果将结合物分为 K D 0.0~0.2、 K D 0.2~0.4、 K D 0.4~0.6等3个组分,每个组分分别以磷酸铝佐剂吸附,将吸附前后的各个组分按照每针次每只小鼠0.2 μg分别免疫小鼠,并采用ELISA检测结合物在小鼠体内的抗体水平。结果 3种不同相对分子质量吸附前后的结合物在小鼠体内均能产生较高水平的抗体,各组2、3针之间具有明显的加强效应。在吸附组和未吸附组中,3种不同分子大小的结合物在小鼠体内产生抗体水平无明显差异。各组分佐剂吸附后的结合物血清抗体滴度高于未吸附组,但这种差异无统计学意义( P > 0.05)。结论 结合物的分子大小对小鼠体内抗体水平的产生没有明显影响;磷酸铝佐剂吸附对于不同分子大小的结合物在小鼠体内的免疫原性有一定的增强效应,但这种增强效应差异无统计学意义。     

4型肺炎球菌多糖丙酮酸含量核磁共振测定方法的建立及验证

目的 建立检测4型肺炎球菌多糖侧链上的丙酮酸(pyruvic acid, PA)含量的定量核磁共振(quantitativenuclear magnetic resonance, qNMR)方法，并进行验证。方法 用以3-(三甲基硅)丙酸-D4钠盐为内标的重水作为溶剂，在600 MHz核磁共振仪上采集波谱，采集参数为：脉冲程序zg30,弛豫延迟时间9 s,扫描次数512次。对方法进行线性、范围、专属性、准确度、精密度、耐用性验证。结果 PA含量在0.10～12.00 mg/mL范围内线性良好，且R²> 0.99。以PA上的甲基质子峰(化学位移1.54 ppm)为特征峰测定PA信号峰，qNMR检测方法专属性良好。两种方法的回收率分别在93.52%～101.37%和92.71%～100.10%之间；建立的方法重复性及中间精密度良好，不同PA含量测定值RSD分别为3.67%,2.12%和3.70%;改变温度和扫描次数，2种条件的测定结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 建立的4型肺炎球菌多糖中PA含量qNMR检测方法简便、切实有效，为13价肺炎球菌结...