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目的:找寻适用于脂联素全序列蛋白的结晶条件,为解析其空间结构奠定基础,从而研究脂联素聚合体的内在构成模式,为开发高活性脂联素类衍生细胞因子提供参考。方法:首先构建脂联素全序列蛋白的真核表达载体,对其进行诱导表达,然后通过经亲和层析和凝胶过滤分离纯化后,得到高纯度的脂联素全序列蛋白,最后尝试使用坐滴法和悬滴法以及多种温度环境和结晶液条件,从而找寻适于脂联素全序列蛋白质的结晶条件。结果:通过纯化后的脂联素蛋白纯度可以达到91.3%,在溶液中的粒径分布于2 nm到4 nm。在线性变温条件下(24 h内,由277 K线性升温至313 K,再线性降温至277 K),通过悬滴法于48 h可获得脂联素全序列蛋白的针状晶体。结论:本研究选择真核载体,以亲和层析和凝胶过滤为分离纯化手段,得到了纯度高,粒径均一的脂联素全序列蛋白。随后通过尝试多种结晶方法、条件和环境,初步确定获得脂联素全序列蛋白晶体的条件,为后续获得高质量单晶提供了参考。 相似文献
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天然细胞外基质和生物体软组织固有的黏弹性是调控细胞行为和组织修复与再生过程的关键因素.基于动态建构化学反应交联得到的动态高分子水凝胶材料可有效模拟在体细胞或组织的黏弹性力学微环境,为体外调控细胞命运、揭示其力学生物学响应机制提供了重要工具,也为组织修复与再生提供了仿生支架材料.本综述在介绍天然细胞外基质及生物体软组织黏弹性的基础上,重点对仿生黏弹性水凝胶材料的设计思路、性能表征及影响因素等进行了概括和总结,并揭示了黏弹性水凝胶调控细胞、组织行为的规律及机制,最后,分析了目前该领域研究中所存在的问题并对未来发展方向进行了展望.本综述将有助于启发高分子水凝胶的仿生功能化设计思路及材料生物学效应研究,进一步拓展高分子水凝胶材料的生物医学应用. 相似文献
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