快速检测食品中葡萄球菌肠毒素的方法及其评价

<正> 在美国和加拿大,葡萄球菌仍然是引起食物中毒的主要病原(1)。用常规方法检测食品中的葡萄球菌是非常局限的,因为葡萄球菌肠毒素比菌体耐热,没能检查出菌体,不等于没有毒素存在。只有直接分析肠毒素,才能找到真正的病原。在过去由于可应用技术的复杂性,或方法灵敏度达不到要求而难以实现。目前现代化仪器设备的大幅度改进和提高,和分析技术的飞速发展,使得直接检查食品中肠毒素的方法成为可能。     

4类葡萄球菌肠毒素的3种放大酶联免疫吸附测定技术的研究

葡萄球菌肠毒素是引起食物中毒的主要致病蛋白质之一。目前由于对各类毒素检查方法的敏感性不太高(ELISA在1～10ng/ml),常常造成漏检。国内仅1篇文献报告采用BA-ELISA测定SEB的最低下限为0.38～1.5ng/ml,去年日本学者报道用BA-ELISA测定TSST的敏感性限30pg/ml。为了进一步提高对各类SE检测的敏感度,我们使用自制的兔抗SEA、兔抗     

层析等电聚焦法提纯葡萄球菌肠毒素D

 我们成功地建立了层析等电聚焦的三步程序,分离提纯葡萄球菌D型肠毒素。首先用CG-50树脂吸附由细菌培养液中获得粗毒素,然后在PBE94柱上进行层析等电聚焦,最后经过Sephacryls-200过滤。纯化的SED纯度约98%,回收率89%,分子量为28500,pI 7.6。Western blot,免疫双向琼脂扩散的鉴定试验表明,纯化SED与其相应抗血清是特异性反应。     

细菌毒素的分子生物学研究进展

一百年来,毒素研究工作在全世界逐步展开,获得了巨大发展。特别是70年代以来发展更快,被称为毒素研究的新世纪,研究工作的深度日益增加,生化、免疫、遗传等最新技术都应用于毒素的研究,因此毒素研究已成了分子生物学一个极活跃的领域。毒素是细菌的主要致病因子,致病力强,对人畜健康危害甚大,无论人医、兽医、不管是在防疫还是医疗方面都日益受到重视。     

金黄色葡萄球菌D型肠毒素抗血清制备和在肠毒素免疫检测上的应用

参考Robbins等文章,制定了制备抗-SED血清的免疫方案,抗原用量6.9mg/兔,注射8针,免疫时间共14周。用免疫双向琼脂扩散方法测定,抗-SED血清效价可达1:128,所制抗-SED血清与高纯度(98%)及低纯度(60%)的SED只产生一条沉淀线,并且融合,与SEA、SEB、SEC_1、SEC_2均没有交叉反应。以抗-SED抗体IgG制备的诊断血球检出灵敏度较高,约1ng/ml。对6种罐头食品人工污染毒素的模拟实验结果,检出灵敏度为1.56ng/ml,略低于含纯SED标本,食物成份对反向血凝检出没     

重组葡激酶基因在大肠杆菌内的高水平表达及生物学活性研究

将测序后的葡激酶重组质粒ＰＵＣ－ＳＡＫ经酶切后,组装于表达载体ｐＢＶ２２０,构建成ｐＢＶ－ＳＡＫ表达质粒,转化大肠杆菌。重组葡激酶表达水平达６０％～７０％,相对分子质量为 １５ ５００,主要以可溶状态存在于细胞中。生物活性测定证实,重组葡激酶具有很强的纤溶活性。     

重组葡激酶的基因克隆与序列测定

从烧伤病房病人烧伤感染创面分离到 9株金黄色葡萄球菌 ,经纤溶活性测定 ,选纤溶活性最高的作为 PCR扩增模板。将扩增出的葡激酶基因片段插入 p UC1 8载体质粒 ,转化大肠杆菌 DH5 α,筛选出 PUC- SAK阳性克隆 ,经 DNA序列测定证实该基因片段为一种新的 DNA序列