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本文研究了广西巴马小型猪和长白猪背最长肌中IGF-1-PI3K/AKT信号通路相关基因的发育表达模式的差异,为今后研究巴马小型猪的生长发育和肉质性状提供分子理论基础.克隆猪INSR、IRS1、IGF-1、PI3K、PI3KR1、PDK1、PTEN、AKT1、FoxO1、mTOR、4EBP1和β-actin基因,构建荧光定量PCR标准曲线,采用实时PCR法检测上述基因在广西巴马小型猪和长白猪出生后1、30、60、90、180 d背最长肌的表达变化.在同一生长发育阶段,PTEN和4EBP1基因的表达均极显著高于同一品种其他基因的表达,FoxO1、PI3KR1和AKT1基因中度表达,IGF-1、INSR、IRS1、PI3K、PDK1基因低度表达;在不同生长发育阶段基因的表达存在显著差异;两个品种猪在同一生长发育时间的表达也存在差异.本研究结果表明广西巴马小型猪和长白猪IGF-1-PI3K/AKT通路相关基因的表达呈现出明显的品种差异性和时空差异性,PTEN、FoxO1和4EBP1基因表达差异可能是两个品种猪肌肉产量和肉质性状存在差异的原因之一. 相似文献
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为了探讨巴马小型猪启动子U6和7SK的功能以及为生产GGTA1基因沉默的广西巴马小型猪奠定基础,文章克隆并分析了siRNA启动子U6和7SK,并分别连接pMD18-shEGFP载体,分别与PEGFP-N1共转猪肾细胞,进行RNAi实验。以pMD18-hU6-shEGFP为阳性对照,无启动子的pMD18-shEGFP载体为阴性对照,单独转染PEGFP-N1为第一组空白对照,以ddH2O替代质粒为第二组空白对照组,验证这两种启动子在猪细胞中的功能。结果表明:广西巴马小型猪RNA聚合酶III型siRNA启动子U6和7SK的序列全长分别为553 bp和437bp。成功构建了pMD18-pU6-shEGFP和pMD18-p7SK-shEGFP干扰载体,转染猪源PK-15细胞,证明U6以及7SK两个启动子具有较高的siRNA表达活性,可以用于α-1,3半乳糖转移酶等猪源基因的沉默实验。 相似文献
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本文旨在研究miR-486-5p对C2C12细胞IGF-1-PI3K/AKT-mTOR信号通路的影响,探讨miR-486-5p在C2C12细胞中对胰岛素信号通过基因的调控机制.利用构建好的miR-486-5p过表达和抑制慢病毒载体,通过脂质体转染法分别在C2C12细胞上过表达和抑制miR-486-5p的表达,利用荧光定量PCR法检测miR-486-5p过表达和抑制效率,同时检测过表达和抑制miR-486-5p后IGF-1、INSR、IRS1、PI3K、PI3KR1、PDK1、AKT1、PTEN、FoxO1、mTOR、4EBP1基因的mRNA变化.荧光定量PCR结果显示24 h过表达倍数和抑制效率分别为2.8倍和35％,48 h过表达倍数和抑制效率分别为1.4倍和15％.过表达miR-486后,24 h和48 h时INSR、PDK1、PTEN、AKT1、FoxO1、4EBP1基因均显著下调;抑制miR-486后,24 h时4EBP1显著上调,48 h时IGF-1显著上调,4EBP1显著下调.本研究表明过表达miR-486-5p后胰岛素信号通路基因的表达受到抑制,抑制miR-486-5p后胰岛素信号通路基因的表达上升,这可能是肥胖患者血清miR-486-5p升高损害胰岛素信号引起葡萄糖摄取能力降低,从而导致胰岛素抵抗发生的原因. 相似文献
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