彩斑突变体菊花CmF3′Ha基因及启动子的克隆与分析

该研究以菊花彩瓣突变体CQ17 mu为材料,利用RT PCR克隆获得了类黄酮 3′ 羟化酶基因(F3′H),该基因开放阅读框全长1 527 bp,编码508个氨基酸,与已知的菊花CmF3′H相似性达到99%,故将其命名为CmF3′Ha。氨基酸序列分析表明,CmF3′Ha编码的蛋白具有保守的F3′H结构域,属于P450超家族。多重序列比对和系统发育分析表明,CmF3′Ha与其他菊花品种的F3′H亲缘关系最近。实时定量PCR分析显示,CQ17 mu花瓣中CmF3′Ha基因的表达水平显著高于CQ17的粉色花瓣,表明CmF3′Ha参与了CQ17 mu花瓣紫色条斑部位的花色素代谢。进一步利用染色体步移法克隆得到了CQ17 mu的F3′H基因上游1 086 bp的启动子区序列,经分析显示,该序列中除包含TATA box等核心启动子元件外,还包括多个MYB、MYC结合位点及多个光响应元件和激素应答元件。研究结果证明了菊花CmF3′Ha基因与植物花青素积累呈正相关,参与彩色条斑部分的花青素合成过程,为菊花的分子育种提供了理论依据。     

甘菊ClCOL16基因的克隆与功能初步研究

CO基因通过光周期途径整合昼夜规律、光信号以及分生组织相关基因来调节开花时间，在植物成花过程中起着至关重要的作用。该研究利用RT-PCR法从甘菊(Chrysanthemum lavandulifolium)中克隆得到一个CO家族基因，命名为ClCOL16(GenBank登录号：AOA52174);采用农杆菌介导的花序浸染法转化拟南芥，抗性筛选并经过PCR鉴定得到T3代转基因植株；随机抽取6个转基因拟南芥株系与野生型(WT)共同于长日照环境(16 h/8 h光暗交替)培养，观察其表型，并于定植后37 d检测WT和转基因拟南芥植株叶片的ClCOL16表达，以明确甘菊ClCOL16基因在植物光周期调控开花中的作用，为进一步解析菊花花期调控机理奠定基础。结果显示：(1)甘菊ClCOL16基因含有一个1 278 bp的编码框，编码425个氨基酸；ClCOL16编码蛋白含有一个B-box和一个CCT保守结构域，为典型的CO家族第Ⅲ组成员。(2)NCBI同源比对分析显示，ClCOL16蛋白与除虫菊COL16蛋白(GenBank登录号：GEZ38716.1)的一致性最高，达到94.38%。(3)荧光定...