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为弥补羊水检查时间过晚之不足,1984年
Simoni利用绒毛标本直接制备法观察染色体获
得成功,此后,即日益为人们所注目。我们改良
了绒毛细胞直接制备方法,以胶原酶代替乙酸
处理,对绒毛细胞直接制备法(简称乙酸法)和
改良法(简称胶原酶法)进行了比较。大致过程
如下: 取妊娠6-7周人流绒毛组织50mg左
右,严格挑选后,生理盐水洗净,移人含最终浓
度0.5,ug/ ml秋水仙素的RPMI 1640培养液中
孵育1小时(pH7.2, 370C),然后分成两份。一
份按乙酸处理法进行制片:(1)去除培养液,加
3m11.5外拘椽酸钠溶液低渗15分钟;(2)加人
数滴3:1的甲醇:冰乙酸预固定10分钟;(3)吸
弃固定液,重复固定巧分钟;(4)吸弃固定液,
加入1m160并乙酸水溶液,处理2分钟,即追加
纯甲醇2ml; (5)吸取细胞悬液于离心管内离心
(1500-1800rpm); (6)冰水滴片,风干,Giemsa
染色。另一份按改良的胶原酶法制备染色体,大
致如下:(1)弃培养液加人15ng/ml胶原酶4ml,
孵育15-20分钟(370C); (2)加人4m1生理盐
水,离心(1000rpm),分钟,弃上清液,经0.75%
氯化钾4 ml低渗20分钟(370C),用甲醇冰醋
酸固定液lml预固定后,依上法离心,弃上清
液;(3)甲醇冰醋酸(3:1)重复固定15分钟,混
匀后自然沉降,吸上层细胞悬液离心,如此重复
二次后,再固定15分钟,气干法制片。28例实
验结果见表1,无论是可数分裂相,还是完整分
裂相出现率,胶原酶法均比乙酸法为高,二者间
有显著差异。 相似文献
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