响应面法优化重组毕赤酵母表达米曲霉碱性蛋白酶诱导条件的研究

为探索重组米曲霉碱性蛋白酶（rAlp）在毕赤酵母中表达的最佳诱导条件,本研究在单因子实验的基础上,运用Box-Behnken设计的响应面试验对诱导条件进行了优化。根据回归分析确定了影响rAlp表达的因子,求得最佳诱导条件为：诱导温度28．53℃,诱导pH6．63,甲醇浓度1．28％。此工艺条件下碱性蛋白酶活力实测值为49．78U／mL,回归模型的预测值与实测值的相对误差〈1％,说明该回归方程与实际情况拟合很好。     

米曲霉发酵玉米秸秆产纤维素酶饲料条件的优化

目的:研究米曲霉发酵玉米秸秆产富含纤维素酶的饲料的最优条件.方法:采用响应面法对发酵条件进行了优化.对Plackett-Burman设计筛选出的麸皮与秸秆比值、固液比和发酵时间三个主要因素再利用Box-Behnken设计进行优化.结果:确定了以上三个因素的最佳值分别为秸秆:麸皮比值为1.32,固液比为0.68,发酵时间为6.1d.在优化的培养基中,纤维素酶活力为522.36U/g,比优化前的469.13U/g高了11.35%.结论:利用响应面法获得了米曲霉发酵玉米秸秆产纤维素酶饲料的最佳发酵条件.     

萝卜干细胞决定基因WUS的电子克隆与序列分析

目的:电子克隆获得萝卜干细胞决定基因WUS的编码序列。方法:利用已知的拟南芥WUS基因序列,采用电子克隆的方法获得了萝卜WUS基因cDNA的序列。并对萝卜WUS的氨基酸序列组成,物理和化学性质,二级的特点以及其与其他植物WUS的进化关系进行了研究。结果:萝卜WUS基因cDNA全长为1 298 bp,包含一个完整的开放读码框(936 bp),编码312个氨基酸。其分子量为35 465.7 Da,等电点为6.99。其与拟南芥WUS的同源性为74.0%。在进化关系上,萝卜与油菜和拟南芥WUS亲缘关系较近。与豆科植物亲缘关系远。结论:初步获得了萝卜WUS基因的编码序列,为进一步研究其功能打下基础。     

舌鳞状细胞癌相关长链非编码RNA的筛选与分析

[目的]获得舌鳞状细胞癌组织与正常舌组织中差异表达的长链非编码RNA,并进行功能注释和参与的生理过程进行初步分析。[方法]利用GEO数据库中GES13601的原始芯片数据,采用affymatrix软件套件对芯片数据进行重新均一化和标准化,并筛选差异表达的长链非编码RNA,查找其参与的生理过程。[结果]舌鳞状细胞癌组织与正常舌组织差异表达的基因个数为5 613个。其中在癌组织中上调的为2 951个,下调的共2 662个。从中筛选到长链非编码RNA 38个,上调19个,下调19个。其中的某些参与涉及肌肉、淋巴生长和癌细胞发送等生理过程,但是大部分的功能未知,尚需进一步研究。[结论]筛选到舌鳞状细胞癌相关的38个长链非编码RNA,为寻找早期舌鳞状细胞癌标志物提供了新的参考。     

一株解淀粉芽孢杆菌生防蛋白的鉴定及分析

旨在鉴定一株拮抗葡萄霜霉病的解淀粉芽孢杆菌在NA液体培养基中的分泌蛋白中与生物防治相关的蛋白组分。采用蛋白质谱的方法对前期筛选到的一株拮抗葡萄霜霉病的解淀粉芽孢杆菌生防菌的在NA液体培养基中的分泌蛋白进行了鉴定。对鉴定到的蛋白采用基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)的方法进行蛋白质组学分析,筛选与生物防治相关的蛋白。结果表明,从分泌蛋白中鉴定到了确定的53种蛋白质,其相对分子量大部分集中到0-100之间(占79.24%);涉及碳水化合物代谢、能量代谢、脂类代谢、氨基酸代谢和生物防御等过程,以及作为细胞组分参与结构组成。发现了6种参与植物与病原菌互作的蛋白,2种属于氨基肽酶家族,4种参与几丁质的生物降解过程。     

紫外诱变选育米曲霉高产蛋白酶菌株

以从自然发酵黄豆酱中筛选的5株野生米曲霉为供试菌株,以这些菌株产蛋白酶(酸、中、碱)、淀粉酶(α-淀粉酶、糖化酶)活力大小为评价标准,筛选出米曲霉K61作为诱变出发菌株。采用紫外诱变对米曲霉K61菌株进行改造,最终筛选出一株蛋白酶活力高且遗传性能稳定的突变株Y29。将米曲霉Y29菌株应用于黄豆酱的生产中,并与目前工业生产中广泛应用的米曲霉沪酿3.042菌株进行比较。性能实验结果表明米曲霉Y29菌株的蛋白酶(酸、中、碱)活力明显高于米曲霉沪酿3.042菌株,但α-淀粉酶、糖化酶、生长速度和孢子数这4个指标两者的差异并不显著;制酱品质试验结果表明,米曲霉Y29菌株的酱香更浓郁一些,氨基酸态氮含量达到0.77g/100mL,高于米曲霉沪酿3.042菌株,其它指标均符合国家标准GB2718-1996。